在医学、生物化学领域通常使用荧光素标记特定分子，以对病变部位进行观察。吲哚菁绿的荧光峰出现在810 nm 附近，属于近红外区域。因为近红外光容易穿透生物体，所以经常被用于观察生物体内部。
荧光分光光度计的传统机型难以在大于750 nm 的波长范围进行测定，而新开发的岛津荧光分光光度计RF-6000 则可在200 nm～900 nm 的宽波长范围进行测定。并且本仪器还配置自动光谱校正功能，可以自动获得用于比较的数据。本文向您介绍使用RF-6000 对吲哚菁绿进行测定的示例
仪器和三维光谱测定：图1 为RF-6000 的外观。RF-6000 带有自动光谱校正功能，能够自动获得荧光和激发校正光谱，去除仪器固有特性（仪器函数）的影响。使用传统机型进行测定时，需要从已测光谱中扣减仪器函数后进行数据处理，而RF-6000 则不需要进行该操作。校正光谱可以用于对不同仪器得到的数据进行比较。 将吲哚菁绿粉末溶解到纯水中，制备成1.3 mg/L 浓度的水溶液。为了检测最佳激发波长，使用LabSolutions RF 软件的三维光谱功能测定了三维光谱。测定三维光谱时，依次改变激发波长，并测定荧光光谱，这样就得到了三维光谱。图2 为测定结果；表1为测定条件。得到的数据中横轴对应荧光波长Em，纵轴对应激发长Ex。本测定只需5 分钟。三维光谱由校正光谱组成。 如图2 箭头所示，在坐标Em 808 nm，Ex 780 nm 处出现荧光峰。由图可知，在780 nm 处的激发波长下检测到样品的强荧光峰。
以三维光谱图的任意坐标自由截取荧光光谱和激发光谱。图3为峰位置下的光谱图。此时，A 线截取图对应荧光光谱；B 线截取图对应激发光谱。由此可知，荧光波长为808 nm，最佳激发波长为780 nm。
总结：
综上所述，使用RF-6000 可在200 nm～900 nm 的宽波长范围进行测定。并对传统机型难以测定的810 nm 附近的吲哚菁绿进行了高灵敏测定。另外，还可以通过自动光谱校正功能，实时获得高精度光谱。今后可期望使用RF-6000 开拓新的应用领域。
