在生命科学领域，荧光素标记的DNA 探针（以下简称“荧光探针”）广泛应用于检测和鉴别特定的DNA。荧光探针会与特定的DNA 进行选择性结合，因此可以利用荧光标记检测到特定的DNA。因为荧光素有多种类型，掌握荧光探针的荧光波长在检测DNA 时十分重要。 本文向您介绍使用荧光分光光度计RF-6000 的三维光谱测定功能，对两种荧光探针进行荧光测定的示例
仪器、测定方法和结果 :
图1 为RF-6000 的外观图。RF-6000 具有三维光谱测定功能和自动光谱校正功能，可以在短时间内对较宽的波长范围进行测定。自动光谱校正功能是指不受仪器影响（不使用仪器函数）自动获得校正光谱的功能，在测定时可以自动获得正确的荧光光谱以及激发光谱。
本次分析对使用不同荧光素标记的荧光探针A、荧光探针B分别进行了三维光谱测定。测试三维光谱时，依次改变激发波长，并测定荧光光谱，这样就得到了三维光谱。得到的数据中横轴对应荧光光谱（Em），纵轴对应激发光谱（Ex）。 图2 为荧光探针A 的测定结果；图3 为荧光探针B 的测定结果。这些是由校正光谱组成的三维光谱。每个样品的测定时间约为3 分钟。如箭头所示，荧光探针A 主要在①和②处出现荧光峰，荧光探针B 主要在①处出现荧光峰。 荧光探针A（图2）的峰①于550 nm 处激发，荧光波长约为600 nm；峰②于510 nm 处激发，荧光波长约为530 nm。荧光探针B（图3）的峰①是于550 nm 处激发，荧光波长约为600 nm。
光谱测定
以三维光谱图的任意坐标自由截取荧光光谱以及激发光谱。此时，横轴方向上截取的光谱将作为荧光光谱；纵轴方向上截取
的光谱将作为激发光谱。 在荧光探针A 三维光谱（图2）中，获得了峰①和峰②的荧光光谱，分别显示在图4 和图5 中。由图可知，峰①的荧光波长为598 nm；峰②的荧光波长为532 nm。 在荧光探针B 三维光谱（图3）中，获得了峰①的荧光光谱和激发光谱。图6 和图7 分别显示荧光光谱和激发光谱。由此可知，荧光波长为604 nm，最佳激发波长为550 nm。 另外，通过三维光谱得到不受仪器影响的校正光谱，由此可检测正确的荧光波长位置
总结:使用荧光分光光度计测定了荧光探针的三维光谱，并且能够自动获得校正光谱。使用传统机型获取校正光谱，需要进行手动数据处理，而RF-6000 则无需该操作。综上所述，使用RF-6000可以高精度高效率的进行荧光测定
