摘要 ：Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱在 4 分钟内分离出 10 种有机酸。色 谱柱规格为 2.1 × 100 mm，2.7 µm 表面多孔颗粒填料。使用磷酸盐缓冲液和乙腈流 动相进行等度洗脱，在 Agilent 1290 Infinity 液相色谱仪上完成分离。
前言 ：表面多孔颗粒填料液相色谱柱是液相色谱 领域常用的工具。与对应的全多孔颗粒色 谱柱相比，这种色谱柱能够在较低压力下 获得较高柱效。这主要是由于该色谱柱的 传质距离更短并且填料颗粒的粒径分布明 显更窄。更高的柱效能够明显提高分离 度和灵敏度，加快分析速度并改善分析 结果。 表面多孔颗粒填料主要用于反相分离。 随着表面多孔颗粒填料的成熟，该项技 术越来越多地运用于化学键合相和其他 色谱技术中，例如亲水相互作用液相色 谱 (HILIC)。HILIC 非常适合极性分析物的 分析，这种分析物通常很难在反相模式 下实现保留和分离。本应用简报展示了 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z, 2.7 µm 色谱柱的 UHPLC 性能及其对 10 种有机酸的基线分离能力。图 1 列出了 这些化合物。
实验部分 ：本研究采用低扩散配置的 Agilent 1290 Infinity 液相色谱仪。表 1 列出具体信 息。表 2 列出所用的色谱方法信息。将 所有化合物的标准品单独进样，表 3 列 出了浓度和样品溶剂。
所分析的 10 种有机酸购自 SigmaAldrich。磷酸钠和磷酸同样来自 SigmaAldrich。乙腈购自 Honeywell (Burdick ａnd Jackson)。水经 Milli-Q 系统 (Millipore) 0.2 µm 滤膜过滤，分子量为 18。 重要事项：磷酸盐在乙腈含量高的溶液中 溶解度较低，并可能在磷酸盐缓冲液与乙 腈混合时发生沉淀。因此，通常不建议将 磷酸盐用于 HILIC 分析。然而，为了能用 二极管阵列检测器在低波长处对有机酸进 行充分检测，磷酸盐必不可少，因为甲酸 盐和乙酸盐会产生明显的基线噪音。为防 止盐在液相色谱系统中沉淀，强烈建议 按表 2 中的详细说明对流动相进行预混 合。应检查预混合流动相，并定期监测盐 的沉淀情况。配制流动相时，如盐或乙腈 的用量超过本应用简报中的规定量，会导 致出现盐沉淀。如需流动相选择更灵活， 请使用兼容甲酸盐或醋酸盐缓冲液的替代 检测器（如 MSD、ELSD 或 RID）。使用 这些缓冲液可能会导致选择性发生变化， 因此需要额外的方法开发。
结果与讨论 ：图 2 中的色谱图显示，10 种有机酸在 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱上得到了基线分离。分离在 4 分钟 内完成，所有化合物均达到了基线分离。 在 InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 键 合相中，采用一种新型两性离子固定相 与稳定的杂化颗粒发生键合，可在高达 80 °C 和 pH 12 的条件下保持稳定。这种 键合相为带电化合物提供了出色的峰形， 并能在较大的极性范围内分离分析物。 HILIC-Z 键合相的上述特征使其非常适合 在具有挑战性的中等 pH 条件下分离有 机酸。
结论 ：Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱提供了一种稳定的有机酸分离方 法。这款色谱柱为所有化合物均实现良好 的分离度和峰形。
