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采用固相萃取结合液质联用系统同时 分析鸡蛋和鸡肉中的利巴韦林与金刚 烷胺
点击次数：3109 发布时间：2020/9/1 20:22:25
前言 ：利巴韦林和金刚烷胺属于抗病毒药物，在人类流感类疾病防治领域应用广泛。但有些违 规养殖户会将其非法用于畜禽疫病防治，如此长期大量使用很容易诱导流感病毒变异， 为动物疫病甚至人类流感类疫病的防治带来不确定性。此外，动物源食品中这些药物的残 留不仅会造成食品风味和品质的下降，还会通过食物链进入人体，长期累积后会产生神经 毒性，并直接诱导人类流感病毒产生变异及耐药性增强，从而威胁人类健康。因此，美国 FDA 和我国农业部都将这两个药物列入兽药禁止使用的范畴。这两个药物虽然已被禁用 作兽药，但实际上还存在非法使用的现象，2012 年爆发的“速生鸡”事件，就是曝光了 某些饲养企业在养鸡时使用了这两种抗病毒药物。 本文建立了一种用于鸡肉、鸡蛋中利巴韦林和金刚烷胺同时分析的固相萃取-高效液相色 谱-串联质谱法
利巴韦林和金刚烷胺分析 对样品进行前处理。称取样品 2 ± 0.01 g，置 50 mL 离心管中，加入 40 µL 混合内标溶液 （D15-金刚烷胺：200 μg/L，13C5-利巴韦林：1000 μg/L），再加入 5 mL 0.5 mmol/L 乙酸 铵溶液 (pH 4.8) 和 40 µL 0.25 U/µL 酸性磷酸酶溶液（购于 Sigma 公司），涡旋 30 秒，置 于摇床上，37 °C 恒温避光酶解 2 小时。
在酶解液中加入 4 mL 5% 三氯乙酸溶液，涡旋 30 秒，10000 r/min 低温离心 10 分钟，移取上清液于另一离心管中，用 5% 氨水调 pH 至 8.5 ± 0.1，加水定容至 10 mL，再次离心，得到上层澄清提 取液。 取 5 mL 样品提取液经 Agilent Bond Elut PBA/PCX 复合固相萃取 柱富集和净化后，使用配备 Agilent Poroshell 120 SB-Aq 色谱柱的 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统/6470 三重四极杆液质联用系 统对目标物进行分析，图 1 为固相萃取操作流程，表 1–3 为液相 色谱、质谱分析条件。
如图 2 至图 6 所示，本方法适合于鸡肉和鸡蛋中利巴韦林和金 刚烷胺残留的检测。方法中利巴韦林和金刚烷胺的定量限分别为 0.08 ng/g 和 0.03 ng/g，分别在 0.1–1000 ng/mL 和 0.02–50 ng/mL 范围内线性相关良好。如表 4、表 5 所示，利巴韦林和金刚烷胺 分别在 1.5–15 ng/mL 和 0.3–3 ng/mL 加标浓度下，在不同基质 中的平均回收率分别为 94.26%–108.50% 和 86.66%–111.90%， RSD 均小于等于 3.75 (n = 3)。由图 7 可以看出用 Bond Elut PBA/ PCX 同时萃取和净化利巴韦林，鸡蛋的基质效应较小，而对于鸡 肉，虽然基质效应相对较为明显，但基质加标样品与溶剂加标样 品的响应比例也是大于 50% 以上的，通过内标校准后仍然可以保 证很好的回收率结果，满足检测方法的需求。
本文所采用的 Bond Elut PBA/PCX 固相萃取柱是含苯硼酸官能团 的独特硅胶基质吸附剂 PBA 和混合式强阳离子交换吸附剂 Plexa PCX 的复合柱，可同时有效地保留和净化样品中的利巴韦林和金 刚烷胺。PBA 可以同时保留酶解后游离出的核苷酸和利巴韦林， 而在酸性洗脱条件下，利巴韦林被洗脱下来，而核苷酸在被洗脱 后重新以阳离子交换机理保留 PCX 填料层；金刚烷胺在开始时 以反相机理被保留在 PBA 或者 PCX 填料上，在酸性条件下洗脱 利巴韦林时则在 PCX 填料层转换为阳离子交换机理进行保留， 从而能够使用甲醇淋洗去除更多非极性保留杂质。整个前处理方 法不但保证了更加干净的净化效果，同时也大大缩短了样品前处 理时间。检测时，配合 Poroshell 120 SB-Aq 色谱柱对目标化合 物进行分析，Poroshell 120 SB-Aq 色谱柱采用薄壳型极性修饰反 相固定相 SB-Aq，可以耐 100% 的纯水相，使色谱柱在低 pH 条 件下使用时也有较长的寿命，同时可实现对目标物的快速分离 分析。
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