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技术文章
pEGFP-N1质粒
点击次数：1413 发布时间：2025/11/25 13:41:40
培养基 酵母膏：5.0g，蛋白胨：10.0g，NaCl：10.0g，pH：7.0(25℃)
生长条件 LB +卡那青霉素，37℃
存储条件 2-8℃
安全等级 0
操作步骤
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10μl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800μl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 μl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。
7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
参考用途 pEGFP-N1是哺乳动物真核表达载体，CMV promoter启动EGFP荧光蛋白表达；SV40 promoter启动NeoR抗性表达。
可以用于GFP报告基因的阳性对照。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
