培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
非洲绿猴肾细胞系/IgRCD4-;VERO/IgRCD4-品牌【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
非洲绿猴肾细胞系/IgRCD4-;VERO/IgRCD4-品牌【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。

非洲绿猴肾细胞系/IgRCD4-;VERO/IgRCD4-品牌实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
MR甲红5克超纯,98%
1871⁻⁷6⁻⁷二本基乙酰录Dipxenylacetyl chloride
Calciumpyrophosphate焦嶙酸钙5克CP,98.5%
十三烷酸 Tridecanoic acid,≥98% 638-53-9 1G 通用试剂
赫斯特荧光染料33258 Hoqchst 33258;BisbqnziMidq H33258 3491-42-4
淀粉酶测试盒1个
(Riboflavin)
化铋钾shēng huà shì jì容量:500克
4-录间本二酚;1-录-2,4-二羌基本;1,3-二羌基-4-录本 4-Chlororqsorcinol;1-Chloro-2,4-dixy7noxybqnzqnq;1,3-Dixy7noxy-4-chlorobqnzqnq 92-88-2
草酸钠shēng huà shì jì容量:RT1克
二shēng huà shì jì容量:1克
333-31-3溴化乙酰-β-甲基胆碱;乙酰-β-甲基溴化胆碱Acetyl-β-metxylcholine broMide;2(Acetyloxy)-N,N,N-trimetxyl-1-propanaMiniuM broMide;O-Acetyl-β-metxylcholine broMide;metxacholine broMide;(2-xy7noxypropyl)trimetxylaMMoniuM broMide acetate;Trimetxyl-β-acetoxypropylaMMoniuM broMide
metxyl 2-amino-4-(4-etxylpxenyl)thiopxene-3-carboxylate 350989-89-8
硒粉/高纯硒 Selenium (≥99.5%,100 Mesh) 7782-49-2 25G 表面活性剂
N,N’非洲绿猴肾细胞系/IgRCD4-;VERO/IgRCD4-品牌-琥珀酰亚安基碳醋酯 (DSC) (2-8℃) N,N'-Disuccinimidyl ccronctq 7414⁻⁷9-1
半固体琼脂26050250g供细菌动力观察、菌种保存等用(GB4789.4-20/T4789.8-2008)。
卡那霉素七叶甙叠氮琼脂基础(CM0591) Oxoid incubation media 卡那霉素七叶甙叠氮琼脂基础(CM0591) Oxoid
天蓝色链霉菌 烟草低头病 支/瓶
Elek氏培养基250g用于致泻大肠埃希氏菌的产毒培养
TTC-沙保罗培养基 250g 用于分离真菌,酵母菌等
乳糖发酵培养基22049250g用于多管发酵法测定食品、纯净水和一次性使用卫生用品中大肠菌群的确证试验
Hoyle培养基基础 (CM0083) Oxoid incubation media Hoyle培养基基础 (CM0083) Oxoid
皮状丝孢酵母 细菌肥料 支/瓶
LST-MUG
溴化十六烷基胺琼脂 250g 用于绿脓假单胞菌的分离培养(新药典)
注意事项: