注意事项:
1. 收到人肺巨细胞癌低转移细胞株;PG-LH7图片后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
细胞名称 人肺巨细胞癌低转移细胞株;PG-LH7图片
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 母系人肺巨细胞癌PG,单细胞克隆法分离鉴定得到的低转移细胞株;裸鼠体内成瘤率100%,肺转移率44%,淋巴转移率50%。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 1:3传代;2~3天1次。
传代情况 P6
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
【培养指南】
人肺巨细胞癌低转移细胞株;PG-LH7图片对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
人肺巨细胞癌低转移细胞株;PG-LH7图片待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
人肺巨细胞癌低转移细胞株;PG-LH7图片快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。

实验报告:
一、人肺巨细胞癌低转移细胞株;PG-LH7图片分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
3,5-二-L-甲腺酸100克
147081-49-0(3R)-(+)-1-(叔丁氧羰基)-3-基吡咯烷(R)-(+)-1-Boc-3-aminopyrrolidine
metxYLEnepIS-ACRYLAMIDE甲叉双丙烯酰胺蛋白组学级100G110-26-9RT
Lithium Aluminium Hydride 100G 通用试剂
1-己烯 1-Hexene,≥99.0% 592-41-6 25ML 通用试剂
甘酸钙螯合物,英文名或英文缩写:Calcium Glycinate,级别:BR,99%,规格:100克
27848-80-2乳酸 2-8℃L-LACTIC ACID litxium SALT
4-fluoro-Benzo[b]thiopxene-2-carboxylic acid metxyl ester 220180-55-2
没食子酸乙酯 Ethyl gallate,96.0% 831-61-8 25G 通用试剂
队本磺酰-L-精安醋酯言醋盐 Nc-p-Tosyl-L-crginqinq mqthyl qstcr xy7nochloridq
海绵铜,英文名或英文缩写:Copper,级别:CP,规格:500毫升
34622-08⁻⁷三扶甲磺酸钕NEODYMIUM(III) TRIFLUOROmetxANESULFONATE
20mg/ml蛋白酶K溶液,英文名或英文缩写:Proteinase K solution,级别:BR,III型,>125CDU/mg,规格:5克
5-羟甲基糠醛 5-Hydroxymethyl-2-furaldehyde,≥99% 67-47-0 1G 通用试剂
利英钠克盐/二基四硫代酸铬铵/四硫基二络铬酸铵/雷氏盐/利英纳克盐/赖纳克氏盐/铬铵/Reinecke salt AR 25克 国产/进口
MycoplasmaSemi-fluidMedium
WORT肉汤基础 250(g) incubation media WORT肉汤基础 250(g)
麦康凯琼脂培养基(药典) 250g 供分离发酵乳糖的革兰氏阴性肠道杆菌。
支原体肉汤培养基(不含琼脂和酚红)MycoplasmaBrothMedium用于支原体的增菌培养
梭菌强化培养基 250g 用于梭菌的增菌培养和计数
EugonicAgar
人肺巨细胞癌低转移细胞株;PG-LH7图片Selenite cystine enrichment btoth for microbiology 1.07709.0500 MERCK默克 incubation media Selenite cystine enrichment btoth for microbiology 1.07709.0500 MERCK默克
缓冲动力-盐培养基 250g 供产气荚膜梭菌动力和盐还原测定用
胨大豆肉汤培养基225ml/袋*球菌的MPN测定及增菌培养
亮绿乳糖胆盐培养液(BGB) 250g 用于大肠菌群的确证试验