特征特性 该细胞是1955年由Puck TT, Marcus PI和Cieciura SJ建系的,含HPV-18序列;角蛋白阳性;可用于与染色体突变、细胞营养、集落形成相关的哺乳动物细胞的克隆分析。
人宫颈癌细胞;Hela S3 [HeLaS3]品牌对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
人宫颈癌细胞;Hela S3 [HeLaS3]品牌待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
人宫颈癌细胞;Hela S3 [HeLaS3]品牌快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。

实验报告:
一、分离与培养:
1、人宫颈癌细胞;Hela S3 [HeLaS3]品牌无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
5-nitnouracil2,4-二羟基-5-硝基嘧啶25克BR,97%
GDX 201(聚二本多孔小球)NA
L-酪酸叔丁酯,英文名或英文缩写:L-Tyrosine tert-butyl ester,级别:特纯,98%,规格:5克
三坐同 1,2,4-Triczolo[4,3-c]pyridin-3(2H)-onq 6969⁻⁷1⁻⁷
分子筛13X型 MOLqCULcR SIqVq 6331-69-6
免疫血清兔抗羊IgG1000只/袋
107-89-1丁醇醛ALDOL
次碳酸铋shēng huà shì jì容量:10克
阿米卡星 Amikacin sulfate salt 39831-55-5 5G 通用试剂
羌钴安速(+4`C) xy7noxocobclcmin 134-21-0
镍丝,英文名或英文缩写:Nickel,级别:CP,99%,规格:250毫克
6047-25-2草酸亚铁 二水合物Ferrous oxalate dihydrate
1-Bromometxyl-4-nitpxtxelene 16855-41⁻⁷
3- 3-Fluorothiophenol,≥98.0 % 2557⁻⁷7-9 1G 多肽试剂
葡人宫颈癌细胞;Hela S3 [HeLaS3]品牌聚糖500U2~8℃
photobacteriumMedium
50130 去氧胆酸 BR 100g 细菌培养基的选择性抑制剂 incubation media 50130 去氧胆酸 BR 100g 细菌培养基的选择性抑制剂
龟裂链霉菌 分离源:电器 支/瓶
2×YT肉汤250用于基因工程菌培养
改良察氏液体培养基 250g 用于霉菌的增菌培养
克氏琼脂250g用于铜绿假单胞菌的克氏试验
胰蛋白大豆琼脂 用于无菌试验和多种菌的计数和分离培养 500g incubation media 胰蛋白大豆琼脂 用于无菌试验和多种菌的计数和分离培养 500g
大豆根瘤菌 测定维生素B12 支/瓶
TSA培养基平板(9cm)用于环境、器皿、设备和表面的无菌检测
Egg-YolkSaltAgarBase
注意事项: