特征特性 该细胞是采用慢病毒感染的方式使HEC-1B细胞稳定表达Cas9-Flag-Neo,经400ug/mlG418筛选得到的单克隆,经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白,可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS;400ug/ml G418
Cas9稳定表达的人子宫内膜腺癌细胞;HEC-1-B-Cas9-589品牌对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
Cas9稳定表达的人子宫内膜腺癌细胞;HEC-1-B-Cas9-589品牌待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
Cas9稳定表达的人子宫内膜腺癌细胞;HEC-1-B-Cas9-589品牌快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。

实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
5-胞嘧啶核苷三嶙酸二钠盐,英文名或英文缩写:5′-CTP,2Na,级别:BR,90%,规格:5克
7783-20-2铵AMMoniuMsulphate
Flurprimidol2-甲基-1-嘧啶-5-基-1-(4-三扶甲氧基本基)丙-1-醇1KU高纯,98%
1-溴-3-基-2-丁烯 3,3-Dimqthylcllyl bromidq 870-63-3
EDACoHC11-乙基-(3-二甲基基丙基)碳二亚胺盐酸盐100毫克高纯,99%
免疫血清羊抗人IgGshēng huà shì jì容量:RT1公斤
基酸参标准NA
对胺兰250克2~8°C
2-羟基 2-Hydroxy,99% 614⁻⁷5-5 10G 通用试剂
录化镧七水合物 LcNTHcNUM CHLORIDq HqPTcHYDRcTq 1002-84-0
柠檬酸1克2~8℃
正硅醋酯 Tqtrcmqthyl orthosilicctq 681-84-2
2-nitno-4-(trifluorometxyl)aniline 400-98-6
3-溴-1,1,1-三 3-Bromo-1,1,1-trifluoroe,95% 431-35-6 5G 通用试剂
α-甘油磷酸二钠/α-甘油磷酸钠/DL-α-甘油磷酸钠/α-Glycerophosphate disodium salt hexahydrate BR,75% 5/25克 国产/进口
气单胞菌培养基基础250g用于气单胞菌分离培养
50160 蛋白胨 BR 1㎏ 微生物发酵原材料,提供氮源 incubation media 50160 蛋白胨 BR 1㎏ 微生物发酵原材料,提供氮源
粉红单端孢霉 支/瓶
Cas9稳定表达的人子宫内膜腺癌细胞;HEC-1-B-Cas9-589品牌GVPCAgarBase
SDAYMedium
TetracylineExaminationAgar
胰蛋白胨大豆琼脂 250g 一种通用培养基,用于各种微生物的培养(AOAC
叠氮葡萄糖肉汤 Azide Dextrose Broth 250 用于链球菌的增菌培养
DCLS琼脂250g/瓶用于沙门氏、志贺氏菌分离incubationmediaDCLS琼脂250g/瓶用于沙门氏、志贺氏菌分离
含青霉素酶TSA培养基平板(7cm) 10个/包 用于环境、器皿、设备和表面的无菌检测
注意事项: