注意事项:
1. 收到 Cas9稳定表达的人子宫内膜腺癌细胞;HEC-1-B-Cas9-588图片后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
细胞名称Cas9稳定表达的人子宫内膜腺癌细胞;HEC-1-B-Cas9-588图片
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞是采用慢病毒感染的方式使HEC-1B细胞稳定表达Cas9-Flag-Neo,经400ug/mlG418筛选得到的单克隆,经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白,可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS;400ug/ml G418
传代方法 消化3-5分钟;1:2传代;3天内可长满。
传代情况 C3
冻存条件 完全培养基+8%DMSO
【培养指南】
Cas9稳定表达的人子宫内膜腺癌细胞;HEC-1-B-Cas9-588图片对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
Cas9稳定表达的人子宫内膜腺癌细胞;HEC-1-B-Cas9-588图片待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
Cas9稳定表达的人子宫内膜腺癌细胞;HEC-1-B-Cas9-588图片快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。

实验报告:
一、Cas9稳定表达的人子宫内膜腺癌细胞;HEC-1-B-Cas9-588图片分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
5-氮杂胞嘧啶核苷,英文名或英文缩写:5-Azacytidine,级别:超纯,99%,规格:25克
7699-45-8溴化锌;无水溴化锌Zinc broMide
百里香酚酞络合指示剂,英文名或英文缩写:TPC,级别:BR,98%,规格:1克
化镍 Nickel(II) iodide, ≥98.0% 13462-90-3 5G 通用试剂
一氧化 2-Methyl-2-vinyloxirane,95% 1838-94-4 5G 通用试剂
免疫血清羊抗人IgM1公斤RT
78⁻⁷6-2溴代仲丁烷2-Bromobutane
含铁牛奶培养基100克
甘脲 Glycoluril,97% 496-46-8 5G 通用试剂
还原型辅酶 II β-NADPH tetrasodium (β-NADPH-Na4, ≥... 606-68-8 25MG 酶和辅酶
柠檬酸shēng huà shì jì容量:RT25克
25791-96-2甘油聚氧丙烯醚POLY(PROPYLENE GLYCOL)
4-(N-Isopropyl-N-(4-metxoxybenzyl)sulfamoyl)pxenylboronic acid 913835-96-8
2-溴-3-甲基噻吩 2-Bromo-3-methylthiophene , ≥99.0% 14282⁻⁷6-9 5G 多肽试剂
强化梭菌培养基25克RT
假单胞分离肉汤250g用于假单胞菌群增菌培养
Cas9稳定表达的人子宫内膜腺癌细胞;HEC-1-B-Cas9-588图片50170 蛋白胨 生化试剂 250 g 检测微生物的培养基原材料,以动物骨肉组织为原材料水解而成 incubation media 50170 蛋白胨 生化试剂 250 g 检测微生物的培养基原材料,以动物骨肉组织为原材料水解而成
费氏志贺氏菌 模式菌株,产菲律宾菌素。 支/瓶
BCYEAgarBase
1%Tween80-CornMeatAgarMediun
SIM培养基250g用于、动力、吲哚试验
胰蛋白胨大豆琼脂 250g 一种通用培养基,用于各种微生物的培养(AOAC
亮绿乳糖培养基 Brilliant Green Lactose Medium 250 用于饮用天然矿泉水中的检验(GB标准)
5000ml/瓶incubationmedia5000ml/瓶
PhysiologicalSaline