实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
碳酸,英文名或英文缩写:litxium caonate,别:AR,100200目,99%,规格:25克
37菠萝蛋白酶 (20℃)BROMELAIN FROM PINEAPPLE STEM 2 U/MG
1Chloro7metxoxy3,4dixy7pxtxelene2carbaldehyde 70
2苯 2Bromothiophenol 632021 1G 多肽试剂
甲叉双酰胺200U
天青Ishēng huà shì jì容量:RT25克
251029四乙酸二钾盐etxylenediaMinetetraacetic acid dipotewwium salt;(etxylenedinitnilo)tetraacetic acid dipotewwium salt;Edetate dipotewwium
脂褐质测试盒shēng huà shì jì容量:RT1000支/包
26甲基 2Bromo6methylpyridine,98% 53253 1G 通用试剂
过铵/高铵/过二铵/过氧
GlucoseDexy7nogenase葡萄糖脱氢酶50克BR,98%
9;本并;氮(杂)ioline;penzo[p]pyni7ine;Chinoleine;Leucoline
NAcetylpxenylhydr1乙酰基2本基25克CP,98.5%
氢钠一水 Sodium bitartrate monohydrate,≥98.0% 5243 100G 通用试剂
2,2二甲基 2,2Dimethylhexane,≥98.0% 5908 1ML 通用试剂
RL95-2, 子宫内膜腺癌细胞系 Human
胚肾细胞(SV40T基因修饰);293T/17
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/USSR/90/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
大鼠骨骼肌成肌细胞;L6 恶性黑色素瘤细胞,A-375[A375]细胞 RF/6A细胞,绿猴猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞
骨骼肌细胞培养基SkMCM-prf
HAVCR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 HAVCR1 / TI
PCR实验方法步骤:
巴布亚旋毛虫探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。产品仅用于科研
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。