2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
xtroseBrothMedium
李氏菌增菌肉汤(LB1,LB2)基础 Listeria Enrichment Broth Base 添加奈啶酮酸,黄素,即为LB1,LB2,用于李氏菌二步增菌(GB标准)
WILKINS-CHALGREN厌氧菌琼脂 WILKINS-CHALGREN Agar 250克 厌氧菌的分离培养
吡哆醇Y培养基瓶用于吡哆醇测定incubationmedia吡哆醇Y培养基瓶用于吡哆醇测定
脑心浸萃液肉汤 250g 用于营养苛求细菌的增菌培养
水杨素分装,与HB使用
FRASER Listeria Selective Supplement 弗雷泽李斯特菌选择添加剂 1.10399.0001 MERCK默克 incubation media FRASER Listeria Selective Supplement 弗雷泽李斯特菌选择添加剂 1.10399.0001 MERCK默克
改良山梨醇麦康凯琼脂基础(CT-SMAC) 250g 用于大肠埃希氏菌0157:H7/NM的选择性分离培养(GB/T4789.36-2008)。
C57BL/6小鼠骨髓
Sabouraud’sGlucoseBrothMedium
沙氏葡萄糖琼脂培养基 300ml/袋*10 用于药品抑菌剂效力检测中真菌检测
Sabouraud’sGlucoseAgarMedium
月桂基盐胰蛋白胨肉汤(LST) 300ml/袋*10 用于大肠菌群,的测定(GB、SN标准)
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-163
胚肺二倍体细胞;KMB-17
CCNE1 Others Human CCNE1 / Cyclin-E1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
ECV304细胞,脐静脉内皮细胞株 小细胞肺癌细胞,NCI-H345细胞 CL-0403NCI-H524(非小细胞肺癌细胞)5×106cells/瓶×2
贾第虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒EC109,食管癌细胞
IL13 Others Cynomolgus 食蟹猴 IL-13 / Ierleuki
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。