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一步法快速感受态细胞制备试剂盒
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 9:52:37
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详细内容
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| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 一步法快速感受态细胞制备试剂盒 | Rapid Competent Cell Preps Kit (One-step) | 40/PK|200/PK |
概述
快速感受态细胞制备试剂盒采用经济快速的方法高效制备感受态细胞，在传统方法的基础上简化了操作步骤，提高了感受态细菌的转化效率。本试剂盒可采用两种方法制备感受态细胞：标准制备法和快速制备法。这两种方法制备感受态细胞比传统CaCl2法和Hanahan法更加简单快捷，不需要0~4℃孵育和传统的热激处理。采用快速方法制备的感受态细胞pUC18质粒转化JM109的转化效率为>1.0×105 cfu/μg；使用标准方法的转化效率为>1.0×106 cfu/μg。
特点
感受态制备过程只需一步悬浮。
适合大/小量快速制备。
制备好的感受态可直接冻存于⁻⁷0℃。
转化过程无需热激步骤。
标准转化效率为106~108cfu/μg DNA。
应用
感受态细胞制备、转化
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英文名称ThromboxaneB2人血栓素(TXB2)规格：96T/48T 74805-90-6甲基麦冬高黄酮A品牌 methylophiopogoA
一步法快速感受态细胞制备试剂盒20316-62-5银椴苷规格 Tiliroside 英文名称RatOsteocalcinELISAKit大鼠骨桥素(Osteocalcin)规格：96T/48T
20316-62-5密蒙花苷厂家 Tiliroside 英文名称RatOsteocalcinELISAKit大鼠骨桥素(Osteocalcin)规格：96T/48T
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20315-25⁻⁷原B1品牌 Procyanidin B1 英文名称RatOsteocalcin(OT)ELISAKit大鼠骨钙素(OT)ELISAKit规格：96T/48T
20283-92-5迷迭香酸规格 Rosmarinic acid 英文名称RaoninIELISAKit大鼠心肌肌钙蛋白I(cTnI)ELISA试剂盒规格：96T/48T
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
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