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OrigamiB(DE3)化学感受态细胞
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详细内容
产品属性:
中文名称:OrigamiB(DE3)化学感受态细胞
英文名称:OrigamiB(DE3)Chemically Competent Cell
产品规格:10×100μl|50×100μl
OrigamiB(DE3)感受态细胞包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase)(trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor)基因,表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性。
该菌株染色体整合了λDE3区(DE3区含有T7RNA聚合酶),可同时表达T7
OrigamiB(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μg。
保存条件:-80℃
基因型:
F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm lacY1 ahpC(DE3)gor522::Tn10 trxB(KanR,TetR)
操作说明:
1.取100μl冰上融化的OrigamiB(DE3)感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项:
1.感受态细胞好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
4.诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5.为获得需要量的蛋白,佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
6.具有卡那霉素抗性,不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。

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