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EHA105农杆菌感受态细胞
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 9:52:37
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详细内容
EHA105菌株由EHA105菌株改造而来，为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA105(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| EHA105农杆菌感受态细胞 | EHA105 Chemically Competent Cell | 10×100μl|50×100μl |
pEHA105(pTiBo542DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：strep，赋予EHA105菌株链霉素抗性，适用于水稻、烟草等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率可达104cfu/μg。
保存条件：-80℃
基因型：
C58(rif R)Ti pEHA105(pTiBo542DT-DNA)(strepR)Succinamopine
操作说明：
1.取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2.每100μl感受态加1μg(体积不大于10μl)质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、28℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3.加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4.6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50μg/ml kan时，28℃培养48h即可；平板中同时加入50μg/ml kan，20μg/ml rif时，需28℃培养60h；如果使用的平板含有50μg/ml rif则需要28℃培养72-90h)。
注意事项：
1.感受态细胞好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
右雷佐生；右丙亚胺Dexrazoxane质量规格：>98%,BR 载玻片细胞βCOLLAGENII蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20 Humaninsulin-likegrowthfactorsbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKit 人胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
盐酸强力霉素/盐酸多西环素Doxycycline HCl质量规格：>97%,BR Mouse6-keto-prostaglandin,6-K-PGELISA试剂盒小鼠6同列腺素(6-K-PG)ELISA试剂盒规格：96T/48T Humanneurofilameprotein,NFELISA试剂盒人神经丝蛋白(NF)ELISA试剂盒规格：96T/48T
盐酸强力霉素/盐酸多西环素（标准品）Doxycycline HCl质量规格：含量测定 小鼠脂蛋白a(Lpa)ELISA试剂盒 ，英文名： Lpa ELISA Kit 组织总脂蛋白胆(TotalL-Cholesterol)酶连续循环比色法定量检测试剂盒20
维生素K3,甲萘醌Menadione质量规格：>98%,BR 猴抗肝细胞膜抗体(LMA)ELISA检测试剂盒Monkeyai-livercellmembraneaibody,LMAELISAKit 96T/48T HumanFMS-liketyrosinekinase3ligand,Flt-3LELISAKit人FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt-3L)ELISA试剂盒规格：96T/48T
英文名称HumanacetylcholineELISAKit人乙酰胆碱(Ach)ELISA试剂盒规格：96T/48T 521-88-0水黄皮素厂家 Karanjin
化大鼠肾上腺髓质素(AM)基因重组表达载体(pCMV5-AM)10微克 5945-50-6水晶兰苷说明书 Monotropein
RathighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISA试剂盒大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒规格：96T/48T 5945-50-6水晶兰苷品牌 Monotropein
小鼠脂肪酸合酶(FASN)ELISA试剂盒 ，英文名： FASN ELISA Kit 604-80-8水仙苷规格 Narcissoside
神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA检测试剂盒Monkeyglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISAKit 96T/48T 29477-83-6水仙环素厂家 Narciclasine
EHA105农杆菌感受态细胞39432-56-9刺五加苷E厂家 Eleutheroside E 载玻片细胞TSH-BETA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20
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39262-14-1人参皂苷CK厂家 Ginsenoside CK 载玻片细胞TNFBETA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20
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