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GV3101农杆菌电转感受态细胞
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详细内容
GV3101菌株为C58型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90(pTiC58DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pMP90(pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| GV3101农杆菌电转感受态细胞 | GV3101 Electroporation-Competent Cell | 10×50μl|50×50μl |

pMP90(pTiC58DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签:Strep和gent,赋予GV3101菌株链霉素和庆大霉素抗性,适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。
GV3101电转感受态特别适用于大质粒的转化:经pCAMBIA2301质粒(size:11633bp)检测转化效率可达5×104cfu/μg;经pCAMBIA2301-ZH质粒(size:40kd)检测转化效率可达5×103cfu/μg。
保存条件:-80℃
注意事项:
1.感受态细胞好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
右旋延胡索乙素(标准品)D-Tetrahydropalmatine质量规格:HPLC≥98%,标准品 ELISAKitPA-IgM人血小板相关抗体IgM规格:48T/96T 神经丝蛋白M(NF-M)ELISA试剂盒 ,英文名: NF-M ELISA Kit
对溴苄胺 4-Bromobenzylamine质量规格:>98% 小鼠肌微管素相关蛋白9(MTMR9)ELISA试剂盒 ,英文名: MTMR9 ELISA Kit PorcineIerferonβ,IFN-β/IFNBELISA试剂盒猪β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA试剂盒规格:96T/48T
2”-O-没食子酰基金丝桃苷(标准品)2”-O-Galloylhyperin质量规格:HPLC≥98%,标准品 人非神经元性烯醇化酶(NNE)ELISA检测试剂盒Humannon-neuronalenolase,NNEELISAKit 96T/48T Humanadiposediffereiation-relatedprotein,ADRPELISA试剂盒人脂肪分化相关蛋白(ADRP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
1,2,3,4,6-O-没食子酰葡萄糖(标准品)1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose质量规格:HPLC≥98%,标准品 大鼠细胞色素C氧化酶(COX)试剂盒 Rat cytochrome C oxidase,COX ELISA Kit humanAi-ThyroidMicrosomeAibody,ATMA/TMABELISAKit人抗甲状腺微粒体抗体(ATMA/TMAB)ELISA试剂盒规格:96T/48T
牛柠檬酸合成酶(CS)ELISA检测试剂盒BovineCiateSyhetase,CSELISAKit 96T/48T 80681-45-4升麻素苷厂家 Prim-O-glucosylcimifugin
人alpha-1能受体(ADRA1)IgG抗体试剂盒 人alpha-1能受体(ADRA1)IgG抗体ELISA Kit 27994-11-2升麻醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷说明书 Cimigenol-3-O-β-D -xylpyranoside
英文名称MouseIerleukin-2ELISAkit小鼠白介素2(IL-2)规格:96T/48T 22910-60⁻⁷银杏酸(C15:1)品牌 Ginkgolic Acid (C15:1)
冰冻切片总脂酶活性格莫瑞(Gomori)染色试剂盒50 161207-05-2升麻酮醇-3-O-α-L-拉伯糖苷规格 Cimigenol-3-O-β-D-xylpyranoside
RatCiliaryNeuroophicFactor,CFELISA试剂盒大鼠睫状神经营养因子(CF)ELISA试剂盒规格:96T/48T 13463-28-0圣草苷厂家 Eriocitrin
GV3101农杆菌电转感受态细胞43043⁻⁷4-9去氧紫草素厂家 Deoxyshikonin 载玻片细胞线粒体复合物II蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20
42719-32-4具栖冬青苷说明书 Pedunculoside 载玻片细胞线粒体复合物III蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20
4261-42-1异荭草苷规格 Isoorientin 载玻片细胞细胞有丝分裂荧光显微镜检测试剂盒10/20
42553-65-1西红花苷规格 Crocin 载玻片细胞钙交换体(NCX)蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20
4233-96-9没食子儿茶素没食子酸酯规格 GCG;Epigallocatechin gallate 载玻片细胞钙ATP酶SERCA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
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