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一步法定向表达试剂盒
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 9:52:30
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详细内容
本试剂盒载体采用了先进的定向拓扑异构酶克隆技术可以在5分钟内将待表达目的基因（高保真酶扩增的平末端片段）一步法定向克隆到高效pET增强型载体，利用T7lac启动子进行严谨调控，高效表达。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 一步法定向表达试剂盒 | One step directional expression Kit | 20次 |
试剂盒组分：
载体————————————20μl
10×Enhancer————————20μl
试剂盒特点：
1. 简单快速，加入待表达基因片段室温仅需5分钟便可完成原核表达载体构建。
2. 定向克隆技术，超过90%插入为正确方向插入，减少克隆筛选耗费的时间。
3. T7lac启动子严谨调控本底表达，实现表达过程的可控和高效表达。
4. 氨苄抗性标记筛选，N端和C端6 ´ Histag标签方便表达后纯化。
5. 带肠激酶(EK)酶切位点，可以方便将标签切除得到不带标签的蛋白。
储存条件：-20℃，有效期半年。
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英文名称MouseCXCL12ELISAKit小鼠B-细胞趋化因子12(CXCL12)规格：96T/48T 602-41-5硫秋水仙苷厂家 Thiocolchicoside
一步法定向表达试剂盒盐酸血根碱厂家 Sanguinarine Chloride 组织无机1/游离1酸根离子比色法定量检测试剂盒20
续随二萜醇厂家 Euhorbiasteroid 组织维生素A含量荧光定量检测试剂盒20
新苦参酮规格 Norkurari 组织维生素A含量比色法定量检测试剂盒20
新苦参醇品牌 Neokurarinol 组织维生素A高效液相色谱法定量检测试剂盒20
豨莶乙素厂家 orientalinB 组织唾液酸(SA)比色法定量检测试剂盒50
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
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