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C端YFP标签融合蛋白质粒(黄色荧光蛋白)
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详细内容
本质粒是哺乳动物细胞表达质粒,用于表达C端含YFP(Yellow Fluorescent Protein, 黄色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的后面有一个YFP的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有YFP标签的融合蛋白。利用YFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白表达水平和细胞内定位,也可以利用YFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。YFP与GFP高度相似,可尝试用GFP抗体检测YFP。该质粒为卡那霉素抗性

| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| C端YFP标签融合蛋白质粒(黄色荧光蛋白) | C-YFP plasmid(with CMV promoter) | 1μg |
使用说明:
1. 次使用时请先取少量本质粒转化,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
储存条件:-20℃。
使用说明:
1. 次使用时请先取少量本质粒转化,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
弗罗利辛 HPLC≥98% 20mg 冰冻切片组织BAX蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20
毛冬青皂苷甲 HPLC≥90% 20mg RatClusterofdiffereiation3,CD3ELISA试剂盒大鼠CD3分子(CD3)ELISA试剂盒规格:96T/48T
冬青素A, HPLC≥98% 20mg 小鼠血小板/内皮细胞粘附分子1(PECAM1)ELISA试剂盒 ,英文名: PECAM1 ELISA Kit
车叶草苷酸 HPLC≥98% 10mg 牛0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)ELISA检测试剂盒Bovinephosphoenolpyruvatecarboxykinase,PCKELISAKit 96T/48T
曲札茋苷 HPLC≥98% 20mg 人8异列腺素F2α(8-iso-PGF2a)试剂盒 Human 8-iso prostaglandin F2α,8-iso-PGF2a ELISA Kit
去氧土大黄苷;甲基虎杖苷 HPLC≥98% 20mg 英文名称MouseIerleukin-1α,IL-1αELISAkit小鼠白介素1α(IL-1α)规格:96T/48T
密力特苷 HPLC≥98% 5mg 冰冻切片组织BCL2蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20
灵芝酸C HPLC≥98% 10mg RatClusterofdiffereiation30,CD30ELISA试剂盒大鼠CD30分子(CD30)ELISA试剂盒规格:96T/48T
苦参酮 HPLC≥98% 2mg 小鼠血纤蛋白原降解产物(FDP)ELISA试剂盒 ,英文名: FDP ELISA Kit
异苦参酮 HPLC≥98% 2mg 小鼠病毒(MMTV)ELISA检测试剂盒mousemamaryumorvirus,MMTVELISAKit 96T/48T
人信号传导转录激活因子1(STAT1)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:STAT1, CANDF7, IMD31A, IMD31B, IMD31C, ISGF-3, STAT91, signal transducer and activator of transcription 1 Human STAT1(Signal Transducer and Activator of Transcription 1) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组STAT1浓度
C端YFP标签融合蛋白质粒(黄色荧光蛋白)人多药耐药相关蛋白1(MRP1)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:ABCC1, ABC29, ABCC, GS-X, MRP, MRP1, ATP binding cassette subfamily C member 1 Human MRP1(Multidrug Resistance Associated Protein 1) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组MRP1浓度
热门标签:C端YFP标签融合蛋白质粒(黄色荧光蛋白)













