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快速姬姆萨染液(适用于血涂片、骨髓涂片染色)
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详细内容
姬姆萨染色(Giemsa stain)是一种标准化的组织学染色方法,通过对染色体染色的原理形态学上区分不同的细胞类型如血小板,红细胞,白细胞和其他细胞。吉姆萨染色液是由亚甲基蓝(methylene blue,),曙红(eosin)和天青B(Azure B)组成的混合液,主要用于血液,骨髓涂片,石蜡切片和其他临床细胞学标本。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 快速姬姆萨染液(适用于血涂片、骨髓涂片染色) | Fast Giemsa Stain | 250ml*1,500ml*1 |
产品组份:
试剂1————250ml
试剂2————500ml

操作步骤
1. 平置血涂片于染色架上,滴加试剂一3~5滴,使其迅速盖满血膜,染色1~2分钟,以固定血片。
2. 不要倒掉试剂一,直接滴加试剂二6~10滴,轻摇玻片或用洗耳球对准血涂片吹气使染液充分混合,染色5~8分钟。
3. 水洗30,待干后镜检。
染色结果
1. 红细胞呈浅红色,中央稍淡而略有蝶形态。
2. 白细胞系统清晰易分,细胞膜清晰呈紫黑色,细胞核着色呈深浅不同的紫红色,胞浆浅红色。胞浆中各种颗粒区分明显。其中1)中性粒细胞胞浆中颗粒呈淡紫红色、嗜酸粒细胞胞浆中颗粒呈桔红色、嗜碱性粒细胞胞浆中颗粒呈蓝褐色。Ⅱ)单核细胞的胞浆呈灰蓝色,胞浆中颗粒呈细小淡紫红色或蓝紫色。Ⅲ)淋巴细胞胞浆呈淡蓝色。
注意事项
1. 推片:取全血3微升左右置载玻片上,将推玻片保持与载玻片30度角,置于血滴正方,稍往后移与血滴接触,即可见血液沿推片下缘散开,再匀速沿载玻片平面平稳向滑动,至血液铺完血膜为止。
2. 涂片时不要太厚也不要太薄。太厚红细胞重叠并易皱,太薄时不易找到白细胞。
3. 用蜡笔在血膜两头划线,平放于染色架上。血膜要干透后才能染色,否则染色时血膜易脱落。
4. 试剂一及二染液不能过少,以防很快蒸发引起染液沉淀。试剂一不可少于400微升,试剂二是试剂一的2倍量。滴加试剂一及二时要轻摇玻片或用洗耳球对准血片吹气,使染液充分混合。
5. 镜检时如果红细胞偏蓝,请放在蒸馏水中1~3分钟,直至红润为止。
6. 染色过淡,可复染。染色过深,可用水冲洗或浸泡,还可用75%乙醇脱色3~5。
储存条件:室温,有效期12个月。
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产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
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