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细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 9:52:23
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详细内容
本试剂盒适用于人和各种动物体外培养细胞的衰老检测。产品性能稳定，参数经优化，着色敏感。仅对衰老细胞进行染色，不会染色衰老的细胞（presenescent cells）、静止期细胞（quiescent cells）、永生细胞（immortal cells）或肿瘤细胞。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒 | Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit | 100次 |
细胞衰老（Cell senescence）是细胞控制其生长潜能的保障机制，一般含义是复制衰老（Replicative senescence，RS），指正常细胞经过有限次数的分裂后，停止分裂，此时细胞虽然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括：1）不可逆的生长停滞；2）与衰老相关的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA β-gal）的活化。作为溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0的条件下表现活性。但是衰老细胞内其在pH 6.0的条件下表现活性，且随着传代次数的增加，细胞群体中表现衰老相关的β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。
本试剂盒正是基于SA β-gal活性变化的生物学特征而设计的，门用于对衰老细胞或组织进行染色检测的一种技术。本试剂盒以X-Gal为底物，通过细胞内SA β-gal在酸性条件下稳定表达，催化底物生成深蓝色产物，从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。
产品组份：
清洗液A——————60 ml
固定液B——————60 ml
酸性液C——————120 ml
稀释液D——————38 ml
染色液E——————2 ml
储存条件：-20℃，有效期一年
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
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