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公司新闻
如何设置TUNEL实验的阳性对照
点击次数：295发布时间：2026/4/24 16:06:18
TUNEL 实验 阳性对照标准设置方法（3 种通用方案，直接照着做）
一、核心原理
TUNEL 检测DNA 断裂的 3'-OH 末端；
阳性对照 = 人为把细胞 / 组织 DNA 切碎，制造大量断裂末端，保证 TUNEL 显色 / 荧光强阳性，用来排除试剂失效、操作失误、假阴性。
二、最常用：试剂盒法（推荐、标准化、结果稳定）
适用
石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片，匹配所有品牌 TUNEL 试剂盒
操作步骤
样本常规预处理：脱蜡 / 固定、通透、蛋白酶 K 处理、PBS 洗净
滴加 DNase I 工作液（TUNEL 阳性对照试剂盒自带）
37℃ 孵育 10～15 min
PBS 充分洗涤，终止酶切
后续完全和待测样本一起，同步做 TUNEL 染色
✅ 结果标准：整片 / 视野强阳性染色
三、简易化学诱导法（无专门试剂盒时用）
1. 细胞样本（细胞凋亡阳性对照）
用凋亡诱导剂预处理细胞：
常用：H₂O₂（200～400 μM）处理 2～4 h
或 星孢菌素 Staurosporine 处理 3～6 h
收获细胞、制片、固定，同批次做 TUNEL。
2. 组织样本
取已知高凋亡组织做对照：
小鼠胸腺、小肠绒毛上皮、肿瘤坏死区组织
天然存在大量凋亡细胞，可直接当阳性对照。
四、快速强酸损伤法（应急极简方案）
适合临时补对照、无试剂条件
切片 / 细胞爬片
滴加 1 mol/L HCl，室温作用 10 min
PBS 充分中和洗涤
再进行 TUNEL 染色
强酸直接断裂 DNA，可稳定出强阳性。
五、一套完整 TUNEL 必须配套 3 组对照（关键！）
✅ 阳性对照
DNase I 处理 / 凋亡诱导样本 → 证明试剂盒、通透、孵育步骤都没问题
✅ 阴性对照（实验阴性）
正常组织 / 细胞，不加 DNase I、不做凋亡诱导，正常 TUNEL 全程操作
→ 看本底非特异染色
✅ 空白对照（试剂阴性）
待测样本，不加 TdT 酶，其余试剂都加
→ 排除 dUTP 非特异结合、背景杂信号
六、关键注意要点
DNase I 孵育不要过长，否则脱片、背景极高
阳性对照、阴性对照、实验组全程条件完全一致（同缸孵育、同时间、同试剂）
若阳性对照都没信号：直接判定实验无效，大概率是 TdT 酶失活、通透不足
若阳性强、阴性也强：通透过度或试剂非特异染色，需优化洗涤 / 通透时间
