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肉毒杆菌AB型双重荧光PCR检测试剂盒PCR扩增
点击次数：718发布时间：2020/7/23 15:53:03
肉毒杆菌AB型双重荧光PCR检测试剂盒PCR扩增
从试剂盒中取出BL-A/B-qPCR MIX、Taq酶系，室温融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N（N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照），每个测试反应体系配制如下表：
试剂 BL-A/B-qPCR MIX Taq酶系
用量 20μl 1μl
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入21μl，向每管中加入处理后样品或BL-阳性质控品和阴性质控品4μl，10000rpm瞬时离心10秒。将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内，推荐循环条件:94℃→2分钟，后94℃ 30秒→55℃ 45秒，40个循环。
荧光通道选择：检测选择FAM通道和HEX/VIC/JOE通道。如果使用ABI系列仪器，请务必在passive reference和quencher处均选择“NONE”。
3. 结果分析判定
FAM通道：Ct值≤35肉毒杆菌A型为阳性；Ct 值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。重复试验之后，如果Ct 值仍然在37-40个循环之间，判断肉毒杆菌A型为阳性，没有荧光值增长肉毒杆菌A型为阴性。
HEX/VIC/JOE通道：Ct值≤35肉毒杆菌B型为阳性；Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。重复试验之后，如果Ct值仍然在37-40个循环之间，判断肉毒杆菌B型为阳性，没有荧光值增长肉毒杆菌B型为阴性。
标本采集和保存与运输
1. 人或动物：
采集新鲜粪便，取黏液脓血部位标本，密闭送检。
2．血液：
采集新鲜抗凝血(非肝素抗凝)，密闭送检。
