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转座子系统不具有生殖细胞特异性
点击次数：1111发布时间：2019/12/20 15:45:50
1940年首先在玉米中发现，以后又陆续在细菌、真菌及昆虫等各种生物中发现。近年来， 转座子系统已经应用于非病毒介导的转基因，尤其是转基因哺乳动物方面。但在转基因禽 类制备方面，基于禽类特殊的生理生殖特点，即：胚胎的早期发育在母禽的生殖系统就已启 动，因而即使是刚产出的蛋，也已发育成具有约60000个形态上未分化的全能细胞的胚盘 (位于囊胚腔），以及禽类受精卵和早期胚胎具有硕大的卵黄、难以直接进行基因操作等原 因，禽类转基因技术一直落后于其它动物。
转基因禽类制备具有繁殖周期短、生产性能高、研究成本较低等优点，其输卵管是 生产蛋白质的天然"发酵罐"。近年来禽蛋生物反应器以其自身的优势和不可限量的前景渐 渐成为一个新的研究热点。其中，转基因鸡制备主要集中于病毒侵染X期胚盘、体外或体内 转染PGCs等方法。这些方法虽然取得了一定成果，但仍然存在转基因效率不高、基因表达抑 制和基因沉默现象以及生物安全性等问题，所以转基因禽类的制备一直以来都缺少一种有 效的、非病毒介导的基因转化系统。转座子介导技术的使用，提高了外源基因在鸡基因组的 整合效率，展示了制备转基因禽类的前景。常用的转座子系统有鲑鱼SB( Sleeping beauty)、 PB(PiggyBac)、Tol2等，都是根据"切割-黏贴"的方式进行转座，可以有效地提高 转基因动物制备效率，但转座子系统不具有生殖细胞特异性，其在体细胞和生殖细胞中基 因转移率相当，所以转基因后代仍存在嵌合体多、性腺基因转移效率低下等问题。
原始生殖细胞(PGCs)是精子和卵子的前体细胞，在PGCs生殖质中含有线粒体16S rRNA和Vasa、0ska、Tudor基因蛋白。Vasa是生殖发育调控重要的基因之一，在胚胎发育过程 中只在性腺组织中表达，具有组织特异性。
发明的目的在于提供一种特异性强、基因转移效率高的特异于禽类原始生殖细 胞(PGCs)的基因转移系统及方法。本发明的发明理念是:构建特异于禽类PGCs的基因转移 系统，该基因转移系统的转座酶辅助质粒含有vasa启动子，由vasa启动子驱动转座酶，利用 vasa启动子能够在PGCs中特异表达的特性，实现转座酶在PGCs中的特异性表达，从而使得 该基因转移系统的转座子供体质粒所携带的目的基因表达盒在PGCs特异性切割整合，由此 提高转座子介导目的基因（如：报告基因或者外源基因等）在PGCs的基因转移特异性和效 率;此外，可以在该基因转移系统的启动子前增加通用增强子元件（即无组织特异性的增强 子元件，如SV40 )，进一步驱动转座酶在PGCs中高效特异表达；转染禽类早期胚胎血液中 PGCs细胞，实现外源基因在禽类胚胎PGCs基因组中高效特异整合，从而提高转基因禽的制 备效率，推动转基因禽研究进展。
