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进行活细胞表面受体分析的一种技术
点击次数：1271发布时间：2018/12/17 10:26:10
SNAP和CLIP是小的融合标签蛋白，可特异地与底物通过苄甲基不可逆共价结合， 其底物分别为苄甲基鸟嘌呤（BG）和苄甲基胞嘧啶（BC）。由于底物可与各种染料形成衍生物，这样，通过共价反应，染料就标记到SANP或CLIP上了。
SNAP或CLIP可以非常容易地融合到蛋白质的N端或C端，所以我们可以构建SNAP或CLIP与目标蛋白的表达载体。质粒转染、融合蛋白表达后，加入标记了荧光染料的底物，我们可以得到标记了荧光染料的目标蛋白。
在Tag-lite技术中，用pSNAP或pCLIP与编码目标GPCR的基因构建质粒，转染入细胞后，就可表达N端融合了SNAP或CLIP的目标GPCR。
底物（BG或BC）与HTRF荧光染料反应形成衍生物，例如与供体（Donor）铽穴状化合物（Lumi4®-Tb）形成衍生物，SANP-GPCR或CLIP-GPCR融合蛋白与其反应，则Tb被标记到GPCR上。加入受体（Acceptor）荧光染料标记的配体，可以进行受体配体结合实验。根据实验目的，HTRF的能量受体（Acceptor）与底物形成衍生物，则Acceptor被标记到GPCR上，可以进行GPCR同源二聚化实验。除此之外，我们还可以进行GPCR异源二聚化实验、寡聚化实验以及内源化实验等细胞表面受体分析。
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