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O型、A型及Asia1型3个型口蹄疫病毒通用套式RT-PCR检测试剂盒
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详细内容
产品及特点 O型、A型及Asia1型3个型口蹄疫病毒通用套式RT-PCR检测试剂盒是由口蹄疫病毒(FMDV)引
起的多种偶蹄动物高度接触性传染病。口蹄疫病毒属于小核糖核酸病毒科口蹄疫
病毒属,病毒基因组为单股正链 RNA,约含 8500 个核苷酸。目前已知该病毒
有 7 个血清型,分别为 O、A、C、Asia1、SAT1、SAT2 和 SAT3,每种血清
型包括多个亚型,各型之间无交叉保护。我国及周边国家流行 O 型、A 型和 Asia1
型 3 种血清的 FMDV,对 FMDV 进行准确定型和遗传变异分析,是 FMD 疫苗
选择和防控措施制定的重要依据。
为此,本公司建立了一种能扩增 O 型、A 型和 Asia1 型 3 种血清型 FMDV
的通用 RT-nPCR 方法,灵敏度高,特异性强。它具有下列特点:
1. 通用性强,可用于 O 型、A 型和 Asia1 型 3 种血清型 FMDV 的定性鉴定检
测和分子流行病学调查。
2. 能对样品中 FMDV 进行快速检测,具有良好的特异性和敏感性。
3. 结合扩增产物的克隆测序技术,可对 FMDV 进行准确分型。
4. 使用一管式 RT-PCR 试剂盒,减少了操作步骤,降低了操作误差。
规格及成分 成分 编号 50 次塑料袋包装
双酶一管式 RT-PCR Buffer,2× 91202A 750 μL
MMLV-Taq Mix 91202B 100 μL
即用型 PCR Mix 3.0 90805 1.5 mL
通用 FMDV 专一性引物对一 yw13151316 100 μL
通用 FMDV 专一性引物对二 yw13171318 100 μL
通用 FMDV 阳性对照 yw13191320 50 μL
超纯水 100935 1 mL
使用手册 1 份
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限一年。
自备试剂 一管式病毒 RANout 或柱式病毒 RNAout
O型、A型及Asia1型3个型口蹄疫病毒通用套式RT-PCR检测试剂盒使用方法 一、样品 RNA 的制备
用自选方法纯化 FMDV 样品的 RNA,也可以另购本公司的一管式病毒
RANout 或柱式病毒 RNAout,上述两款产品跟本试剂盒兼容。
二、阳性对照
1. 为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对
照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 使用本阳性对照时,由于其浓度较高,一定要注意不要污染其他试剂和成分。
最好在专门的区域操作。
三、设置 RT-nPCR 反应
(一) 第一次 RT-PCR:
3. 在 PCR 管中加入下列成分(30 uL 体系):
成 份 样品 阳性对照 阴性对照
双酶一管式 RT-PCR Buffer,2× 15 uL 15 uL 15 uL
通用 FMDV 专一性引物对一 2 uL 2 uL 2 uL
样品 RNA 1-5 uL 无 无
通用 FMDV 阳性对照 无 2 uL 无
补超纯水到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL
4. 轻柔混匀后上机,按下面参数进行 RT-PCR。
过程 温度 时间
逆转录 60℃ 30 分钟
预变性 95℃ 5 分钟
PCR 反应
(30 个循环)
94℃ 30 s
58℃ 40 s
72℃ 1 分钟
延伸 72℃ 5 分钟
5. 电泳检测 RT-PCR 产物。预期的 PCR 产物长度为 1187 bp。
(二) 第二次 PCR:
6. 在 PCR 管中加入下列成分(25 uL 体系):
成 份 样品 阳性对照 阴性对照
通用 FMDV 专一性引物对二 2 uL 2 uL 2 uL
第一次 RT-PCR 产物 1-2 uL 无 无
通用 FMDV 阳性对照 无 2 uL 无
补超纯水到 12.5 uL 12.5 uL 12.5 uL
即用型 PCR Mix 3.0 12.5 uL 12.5 uL 12.5 uL
7. 轻柔混匀后上机,按下面参数进行 PCR。
过程 温度 时间
预变性 94℃ 3 分钟
PCR 反应
(30 个循环)
94℃ 30 s
58℃ 40 s
65℃ 1 分钟
延伸 65℃ 5 分钟
6. 电泳检测 PCR 产物。预期的 PCR 产物长度为 996 bp。
O型、A型及Asia1型3个型口蹄疫病毒通用套式RT-PCR检测试剂盒关联产品 猪流行性腹泻病毒 RT-PCR 检测试剂盒(CAT#:11-4150)、猪瘟病毒 RT-PCR
检测试剂盒(CAT#:11-4230)
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热门标签:O型,A型及Asia1型3个型口蹄疫病毒通用套式RT-PCR检测试剂盒













