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Wistar大鼠骨髓间充质干细胞
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详细内容
产品特点细胞特性:
经测试,本产品具有良好的增殖和分化潜能,可分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。
质量控制:
本产品经过了细菌、真菌、支原体检测。
运输保存:
采用干冰保存运输。
收到细胞时,若干冰已经完全融化,请立即将细胞复苏培养;若尚留有干冰,请立即将细胞放入液氮中保存待用,请按指定条件贮存细胞,切不可将细胞置于高温环境。
产品承诺:
Wistar大鼠间质干细胞的体外培养周期有限。建议使用本公司配套的培养基和正确的培养方法来解冻、传代,以此保证细胞具备良好的增殖和分化能力。
用途:
本产品只提供给进一步的科研使用,不可应用于治疗等其他方面。
产品介绍
骨髓间充质干细胞是一种能分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞的多能干细胞。
因其具有强大的增殖能力和免疫调节功能,故被广泛应用于组织工程,细胞治疗和基
因治疗。
OriCell Wistar大鼠骨髓间质干细胞取自Wistar大鼠的骨髓,拥有强大的自我更新
能力并具有多向分化潜能。
质量控制:
本产品经过了细菌/真菌,支原体,内毒素检测。
本产品还经过细胞复苏活力检测,细胞周期,分化潜能鉴定。
该产品仅提供给进一步科研使用,不可应用于临床治疗等其他方面。 产品特性
操作规范的条件下,本产品有良好的传代能力,至少能传5代。
本产品有良好的分化潜能,能分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。
流式检测鉴定CD29、CD44、CD90(>70%),CD34、CD45、CD11b阴性(<5%)。
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产品应用领域
目前,Wistar大鼠骨髓间质干细胞作为一个研究热点被广泛应用于再生医学和组
织工程(特别是在骨、心血管和神经系统等疾病的领域)。
OriCellWistar大鼠骨髓间质干细胞可作为细胞模型被应用于增殖,移植和分化研
究,以及体内外的免疫反应的鉴定。 处理原则
1. 要在无菌的条件下处理该产品。
2. Wistar大鼠骨髓间质干细胞一旦培养起来,请冻存一部分细胞作为备份。
注意:Wistar大鼠骨髓间质干细胞能被冻存或复苏至少一次。
3. 我们强烈建议用于科研的细胞代次不超过10代。
4. 我们建议一般细胞接种密度是2.5-4.0×10
4个活细胞/cm2,具体数量请根据细胞状
态加以调整。
注意:我们强烈建议使用OriCell培养基和其他相关试剂以达到最理想的培养效果。
OriCellWistar 大鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养
所需试剂
OriCell Wistar大鼠骨髓间质干细胞完全培养基(货号:RAWMX-90011)
Wistar大鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养
1. 准备好37℃水浴。
2. 准备好Wistar大鼠骨髓间质干细胞完全培养基,温育到37℃。
3. 在15 mL离心管中加入9 mL完全培养基。
4. 从液氮中取出冻存的骨髓间质干细胞,立即放入-80℃冰箱(目的是让进入冻存管
的液氮稍加挥发)。
5. 在-80℃放置2-3 min后,取出冻存细胞,将冻存管迅速放入37℃温水中,快速晃
动使管中内含物尽快融化。仔细观察,待冻存管内含物完全融化后取出。
注意事项
注意:
注意:
1 尽可能避免水没过管帽,以减少污染的风险。
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2 要快速完成细胞复苏过程,融化过程时间过长,会造成复苏后的细胞活性较差。
6. 用70%⁻⁷5%的酒精消毒冻存管口的外壁。
7. 在超净台中打开冻存管,用吸管将细胞冻存悬液移入装有9 mL完全培养基的15
mL离心管中。注意避免产生气泡。
8. 为了减少细胞损失,往冻存管中加入1 mL完全培养基,稍微吹打,用吸管将这1
mL的细胞悬液吸入离心管中,再用吸管将离心管中的细胞轻轻吹打混匀。
9. 将细胞悬液经250 g(对应于Eppendorf 5810R离心机是1134 rpm)离心5 min。
10. 尽量去除上清液,向细胞沉淀物加入1-2 mL的完全培养基(已预热到37℃),轻
轻吹打均匀。
11. 将细胞全部接种到1个T25培养瓶或底面积相当的培养器皿中,加入足量的完全培
养基。轻轻摇晃细胞培养器皿使细胞均匀分布。
12. 放入37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。
13. 复苏后的第二天,给复苏的细胞换用新鲜的完全培养基(已预热到37℃)。
14. 之后,每两天给细胞换新鲜的完全培养基直到细胞达80%-90%的汇合度。
15. 当细胞达80%-90%的汇合度,进行消化传代。
注意:为避免反复温热培养基,如果在一次操作中无法用完整瓶培养基,建议分装到
适当的无菌容器中。换液时只取当天所需培养基量进行预热。
所需材料
0.25%Trypsin-0.04%EDTA(货号: TEDTA-10001)
Phosphate-BufferedSaline (1×PBS) (货号: PBS-10001)
OriCell Wistar大鼠骨髓间质干细胞(货号:RAWMX-01001)
OriCell Wistar大鼠骨髓间质干细胞完全培养基(货号:RAWMX-90011)
传代
1. 将Wistar大鼠骨髓间质干细胞完全培养基、1×PBS、0.25%Trysin-0.04%EDTA预热
至37℃。
2. 吸去培养液。
3. 用1×PBS(T25培养瓶加入约3 mL,T75培养瓶加入约6 mL)洗涤细胞2-3次,注
意不要损害贴壁的细胞。
4. 吸去1×PBS。
5. 加入0.25%Trypsin-0.04%EDTA (T25培养瓶加入约1 mL,T75培养瓶加入约2-3
mL)。轻轻旋转,使Trysin-EDTA覆盖细胞表面,消化,显微镜下观察到约70%- 80%左右的细胞变圆后,用手轻拍培养器皿的壁使细胞脱壁。
注意:由于不同实验室所使用的Trysin效价不同,消化时间可能会略有不同,具体时间应
以显微镜下观察到的情况为准。
6. 当看到明显的细胞脱落下来,立即加入预热的完全培养基(T25培养瓶加入约3
mL,T75培养瓶加入约6 mL)终止消化。
7. 用吸管吸取液体,反复吹打培养器皿底壁,使细胞彻底脱离器皿底壁。吹打时动
作不宜太猛,尽量避免产生气泡。
8. 将细胞悬液转移到15 mL的离心管中。×
9. 250 g,离心5 min。
10. 小心弃去上清液。
11. 加入2 mLWistar大鼠骨髓间质干细胞完全培养基重悬细胞。吹打时动作不宜太猛,
尽量避免产生气泡。
12. 对细胞进行台盼蓝染色计数活细胞数量。
13. 按照2.5-4.0×10
4个活细胞/cm2的密度来接种细胞。
14. 加入适量的完全培养基,轻轻摇晃细胞培养器皿,使细胞均匀分布。
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15. 把细胞放入37℃,5%CO2,饱和湿度的培养箱中培养。
提示
1. 换液时机
传代后发现有很多死细胞,应该予以换液。
当完全培养基 pH 值变低(培养液的颜色变黄),而此时细胞仍未能做传代处理时,
应该予以换液。一般来说,Wistar 大鼠骨髓间质干细胞的换液间隔为 2-3 天。
2. 传代时机
当 Wistar 大鼠骨髓间质干细胞达到 80%-90%汇合时,就应该进行传代。不可让
Wistar 大鼠骨髓间质干细胞完全融合或过度融合,否则会发生生长接触抑制。这将严
重影响细胞的生长状态。
P3-40× P3-100×
图2 已贴壁的Wistar大鼠骨髓间质干细胞(P3)
3. 细胞汇合度提示(以C57 MSCs为例)
图3 细胞约70%⁻⁷5%汇合 图4 细胞约85%-90%汇合
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OriCellWistar 大鼠骨髓间质干细胞的冻存
所需材料
• OriCell间质干细胞无蛋白非程序冻存液(货号:GUXMX-07021)
冻存
注意:冻存前24小时需要给细胞换上新鲜的完全培养基。
1. 待细胞生长至可传代的密度,即可消化准备冻存。
2. 细胞的消化请参考OriCellWistar大鼠骨髓间质干细胞的传代操作中1-8步骤。
3. 对细胞进行计数。
4. 细胞悬液经250 g离心5 min。
5. 小心弃掉上清。
6. 用OriCell间质干细胞无蛋白非程序冻存液重悬细胞,并使细胞的密度为1×10
6个活
细胞/mL(或希望达到的细胞密度)。
注意:OriCell间质干细胞无蛋白非程序冻存液在使用前需保持4℃。
7. 把细胞分装到冻存管(需提前做好标记或贴上标签)中,旋紧冻存管盖。
8. 将冻存管直接放进-80℃冰箱。24小时后将细胞转移到液氮进行长期保存。
注意:如使用程序冻存液,需将冻存管放入程序降温盒后方可放入-80℃冰箱。
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