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西方蜜蜂微孢子虫染料法荧光定量PCR试剂盒1480410
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详细内容
【英文名称】Nosemaapis
【产品信息】
西方蜜蜂微孢子虫染料法荧光定量PCR试剂盒应用及特点
本产品是根据探针法荧光定量RT-PCR原理开发的PCR检测试剂盒,它具有下列特点:(如需更详细的完整说明书,可联系客服添加微信或QQ免费索取。)
1. 即开即用,用户只需要提供样品 RNA 模板。
2. 引物等组分经过优化,灵敏度高。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. 特异性高,引物是根据DNA/RNA 序列高度保守区设计,不会跟其他病毒的 RNA 发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5 个数量级。
6. 本产品足够 50 次 20µL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
7. 本产品只能用于科研。
【组成】
成分 | 十孔盒包装 |
2×qPCR Magic Mix | 500 µL(棕色管) |
荧光PCR 专用模板稀释液 | 1 mL(黄盖) |
病毒染料法 qPCR 引物混合液 | 100 µL(白盖) |
病毒染料法 qPCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/µL) | 50 µL(黄盖) |
使用手册 | 1 份 |
西方蜜蜂微孢子虫染料法荧光定量PCR试剂盒使用方法:
一、DNA 提取(样本制备区)
用自选方法提取纯化样品DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
二、稀释标准曲线样品(样本制备区)
(由于阳性对照浓度高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,避免污染样品或本试剂盒的其他成分)。
1. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
2.用带芯枪头分别加入45 µL DEPC-H2O,(用带芯枪头,下同)。
3.在7号管中加入5 µL 1×10E8拷贝/µL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/µL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头,在6号管中加入5 µL 1×10E7拷贝/µL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/µL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头,在5号管中加入5 µL 1×10E6拷贝/µL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/µL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
若无需制作标准曲线,将阳性对照稀释到1×10E5拷贝/µL即可。
成分 | 样品管 N+2 个 | PCR 阴性 对照管 | PCR 阳性 对照管(2⁻⁷ 管) |
2×qPCR MagicMix | 10 µL | 10 µL | 各 10 µL |
染料法qPCR 引物混 合液 | 2 µL | 2 µL | 各 2 µL |
自备 10×ROX (见注) | 2 µL | 2 µL | 各 2 µL |
N+2 待测样品 cDNA 模板 | 6 µL | - | - |
自备超纯水 | - | 6 | - |
第 7 步所得 PCR 阳性对照稀释液(2⁻⁷ 号) |
- |
- | 各 6µL(2 号样到 2 号管,3 号样到 3 号管…) |
三、试剂配制(试剂准备区)
若有N个待检样品,准备N+2个qPCR管(N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照),向各PCR管中分别加入下列成分(见详细说明书,可向我司索取)
转移至样本准备区。
四、添加模板(模板添加区)
向qPCR管中分别加入2ul模板,加样顺序为阴性对照(DEPC-H2O)、待测样品模板、qPCR阳性对照,离心30秒,立即进行扩增反应。
五、扩增反应(扩增及产物分析区)
将PCR管放置在PCR扩增仪器样品槽相应位置,进行扩增,扩增程序如下:(见详细说明书,可向我司索取)

西方蜜蜂微孢子虫染料法荧光定量PCR试剂盒结果分析
1. 如果制作标准曲线,则以阳性对照浓度的log 值为横轴,以Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct 值从标准曲线上推算出样品DNA 浓度的log 值,推算出其浓度。
2. 如果未制作标准曲线,按照如下标准判定结果:阳性对照(1×10E5 拷贝/µL)结果:Ct 值<30,有明显指数增长,呈典型的 S 型曲线。阴性对照结果:Ct 值>40 或无 Ct 值,无明显指数增长期和平台期。样本检测结果:Ct 值<38,有明显指数增长,表明样本中检测出该病毒,结果为阳性;Ct 值>40 或无 Ct 值,表明样本中未检测出该病毒,结果为阴性;Ct 值在 38-40 范围,应对样本进行复检,如重复实验结果 Ct 值仍在 38-40 范围,有明显指数增长,则判定为阳性,否则为阴性。
运输及保存:低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
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