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公司新闻
Western Blotting 问题解答
点击次数：1199发布时间：2023/5/31 9:17:29
1、胶片上存在反转印象（如：亮的条带、黑的背景）？
原因：HRP的浓度过高；
解决：稀释HRP至少10倍。
原因：HRP的浓度过高；
解决：稀释HRP至少10倍。
原因：HRP的浓度过高；
解决：稀释HRP至少10倍。
原因：HRP的浓度过高；
解决：稀释HRP至少10倍。
原因：
1.太多的HRP积聚导致信号快速的消退；
2.抗原或抗体的浓度不够；
3.转印不成功；
4.HRP或其他底物的效价降低。
解决：
1.稀释HRP至少10倍；
2.增加其浓度；
3.寻找合适的转移方法和条件；
4.选择其他的合适底物。
原因：
1.HRP浓度过高；
2.封闭无效；
3.不适合的封闭试剂；
4.洗涤不充分和洗涤液的量；
5.胶片曝光过度；
6.抗原或抗体的浓度太高。
解决：
1.稀释HRP至少10倍；
2.寻找合适的封闭方法；
3.选用其他的封闭试剂；
4.增加洗涤的时间,次数；
5.减少曝光时间；
6.稀释抗原或抗体。
原因：
1.蛋白质没有被充分转印；
2.膜没有预先浸湿；
3.在胶片和膜之间有气泡。
解决：
1.寻找合适的转移方法和条件；
2.在转印充分浸湿；
3.在暴光之赶走气泡。
原因：HRP标记的抗体出现了积聚；
解决：稀释HRP至少10倍。
原因：
1.HRP浓度过高；
2.SDS促使非特异蛋白质条带黏附在目的蛋白质条带上。
解决：
1.稀释HRP至少10倍；
2.在操作过程中不要加SDS。
