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资料下载

悬浮细胞在细胞培养瓶中的接种

点击次数： 600发布时间：2018/12/14 9:21:17

  • 上 传 者： 上海雅吉生物科技有限公司
  • 上传时间： 2018/12/14 9:21:17
  • 文件大小： 38KB
  • 文件类型： png
  • 所属分类： 应用方法
  • 下载次数： 222次
  • 查看次数： 600

资料简介：  实验方法原理淋巴样细胞通常呈悬浮状生长。常用的培养液为含 10%~15%FBS 的 RPMI1640 各种细胞系间最佳接种密度和平台期细胞密度各不相同。当培养一种新的细胞系时其最佳原则为按 1:2 和 1:4 的比例传代细胞，在 3~4 天时间内进行细胞计数以计算每毫升细胞数。细胞在传代后 24~36 小时细胞数会翻倍。传代细胞密度太低，细胞容易死亡，反映出细胞在达到增长前有较长滞留期。一旦细胞适应实验室的培养条件冉决定备细胞株的最佳接种密度。细胞每毫升接种数量可从 5x104~8x105 不等培养液 PH 下降呈现黄色，表明细胞已达到最大密度需要进行换液或传代培养。

 
悬浮生长细胞传代一般只需简单稀释操作即可，若需完全更换培养液只需低速离心沉淀，再悬于合适的培养液中即可。
实验材料淋巴样细胞
试剂、试剂盒含 10%~15%FBS 的 RPMI1640培养液
仪器、耗材细胞培养瓶
实验步骤
1、 如果细胞未在转瓶中培养，只需摇晃、刮取或胰蛋白酶处埋（见下文“胰蛋白酶处理分离细胞”）即可将细胞从细胞瓶表面分离下来。
 
2、轻轻地吹打细胞（移液管上下吹打），将细胞团吹散。
 
3、取1ml 细胞悬液进行细胞计数，勿让细胞沉积在瓶底。轻轻来回转动细胞瓶使细胞处于悬浮状态。
 
4、稀释细胞，使其终浓度约为每毫升 2x105~4x105。
 
5、进行细胞计数，并用台盼蓝排斥试验进行细胞活力检测，操作方案见下文“细胞计数”。
收起 
注意事项
注意无菌操作，操作前用酒精擦拭双手。
其他
悬浮细胞培养的优点：繁殖速度快、可以培养出龄期均一的细胞集团。
 
来源《细胞实验指南（上册)》作者：黄培堂。
 

悬浮细胞在细胞

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