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技术文章
山梨醇含量试剂盒
点击次数：3339 发布时间：2022/6/1 8:21:36
分光光度法 50管/48样 注 意 ：正式测定务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： 山梨醇广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是糖运输形式之一，而且与生物抗逆性和食物风味密切相关。因此，在糖代谢、抗逆性和食品研究中经常需要检测山梨醇含量变化。 测定原理： 山梨醇在碱性溶液中与铜离子形成蓝色络合物，在655nm波长有特征吸收峰。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 试剂的组成和配制： 试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：液体10mL×1瓶 ，4℃保存。 山梨醇的提取： 按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.2g组织，加入2mL蒸馏水），研磨成匀浆， 95℃水浴10分钟（盖紧，以防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心10min，取上清液待测。 测定步骤： 1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至655nm，蒸馏水调零。 2、加样表（在EP管中依次加入下列试剂）： 试剂（μL） 空白管 测定管 试剂一 150 150 试剂二 140 140 样本 1000 蒸馏水 1000 混匀后室温静置15min，8000g，25℃离心10min，取上清液测655nm下吸光值A，计算ΔA=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。 山梨醇含量计算： 1、标准条件下测定回归方程为y = 0.352x - 0.002；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。 2、按照样本质量计算 山梨醇含量（mg /g 鲜重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷W 3、按照样本蛋白浓度计算 山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷Cpr V1：加入样本体积，1mL；V2：加入提取液体积，2 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量， g 注意： 低检测限为1μg/g鲜重或0.01μg /mg prot
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
