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技术文章
考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒
点击次数：3310 发布时间：2022/5/9 8:40:18
分光光度法 50管/48样 注 意：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。 测定原理： 在酸性溶液中，考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合形成蓝色复合物；该复合物在620nm处有大吸收峰， 其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。该方法灵敏度高，适合微量蛋白质分析。 自备仪器和用品： 离心机、分光光度计、石英比色皿、移液器和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体30 mL×1瓶，4℃保存。 样品中可溶性蛋白质提取： 1. 液体样品：澄清液体样品可以直接测定。 2. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：20的比例（建议称取约0.05 g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水）） 冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即待测液。（动物样品常常需要稀释） 3. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 测定操作： 1. 分光光度计预热30 min，蒸馏水调零。 2. 在石英比色皿中加入： 试剂（μL） 测定管 空白管 样本 500 蒸馏水 500 试剂一 500 500 混匀后，测定波长620 nm吸光值，△A=A测定-A空白。 注意：空白管只需要测定一次。 计算公式： 标准曲线：y = 14.253x - 0.0007 R2 = 0.9997 x: 蛋白标准品浓度(mg/mL) y: 吸光值差值 1.按液体样本体积计算： Cpr（mg/mL）=(△A+0.0007)÷14.253 =0.07×(△A+0.0007) 2.按组织样本质量计算： Cpr（mg/g）=(△A+0.0007)÷14.253×V总÷W =0.07×(△A+0.0007)÷W V总：提取液体积，1 mL; W：样本质量，g。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
