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技术文章
生物碱含量试剂盒
点击次数：3327 发布时间：2022/4/24 8:08:32
生物碱含量试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意 ： 正式测定取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
生物碱存在于自然界（主要为植物，但有的也存在于动物）中的一类含氮的碱性有机化合物， 大多数有复杂的环状结构，氮素多包含在环内，有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。
测定原理：
生物碱与溴甲酚绿指示剂反应，生成绿色化合物，在 416nm 处有大吸收峰。
需自备的仪器和用品：
分光光度计、水浴锅、超声波清洗器、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、80%乙醇、绿仿和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体 10mL× 1 瓶，4℃保存； 试剂二：液体 50mL × 1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 20mL × 1 瓶，4℃避光保存；
生物碱的提取：
样本烘干粉碎，过 80 目筛。称取约 0.1g 样本，加入 0.1mL 试剂一，再加入 0.9,mL80%乙醇， 充分混匀后转移到EP 管中，超声波提取 60min， 8000 g，25℃离心 10 min，取上清液待测。另取空 EP 管，加入 0.1mL 试剂一和 0.9,mL80%乙醇，混匀后作为空白液。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 416nm 处。
2、操作表：在EP 管中加入如下试剂
| 试剂名称（µL ） | 空白管 | 测定管 |
| 样本 |
| 150 |
| 空白液 | 150 |
|
| 试剂二 | 750 | 750 |
| 试剂三 | 300 | 300 |
混匀，室温静置 5min
| 绿仿 | 1500 | 1500 |
剧烈振荡混匀，室温静置 40min，吸取下层绿仿层 1mL 于 1mL 玻璃比色皿，416nm 处读取吸光值 A，ΔA=A 测定-A 空白，空白管只要做一管。
生物碱含量计算：
标准条件下测定的回归方程为 y = 3.83x - 0.0005，R2 = 0.9942；x 为标准品浓度（mg/mL），
y 为 ΔA。
生物碱含量(mg/g 干重)=(ΔA+0.0005)÷3.83×V 样总÷W= 0.261×(ΔA+0.0005) ÷W
V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
