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技术文章
果胶裂解酶（pectinate lyases，PL）试剂盒
点击次数：3312 发布时间：2022/4/22 8:49:15
分光光度法50管/24样 注 意 ：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 果胶裂解酶（EC4.2.2.10）是果胶酶的重要组成部分，是一种能降解植物细胞壁，导致植物组织软化甚至死亡的解聚酶，来源比较广泛，主要来源于微生物，可用于果汁、果酒的澄清，提高水果出汁率，植物病毒的纯化，纸浆的漂白和纺织品的生物精炼，在减少环境污染和降低能源消耗方面具有潜在的应用价值。 测定原理： 果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4糖苷键，生成在还原端C4和C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸，在235nm处有特征吸收峰。 自备实验用品及仪器： 天平、低温离心机、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿、恒温水浴锅。 试剂组成和配制： 提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：液体15mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体15mL×1瓶，4℃保存。 酶液提取： 1．组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2．细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）；然后10000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。 3. 培养液：直接测定。 测定操作表： 对照管 测定管 试剂一（μL） 600 试剂二（μL） 600 40℃温育3min 酶液（μL） 100 100 混匀，40℃反应30min 试剂三（μL） 300 300 混匀，对照管调零，1mL石英比色皿测定235nm处吸光值A。 酶活性计算公式： 1. 组织中PL活性 （1）按照蛋白浓度计算 酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。 PL活性（nmol/min/mg prot）= A÷（ε×d）×V反总÷（V样×Cpr）÷T = 64.1×A÷Cpr （2）按照样本质量计算 酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每克组织每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。 PL活性（nmol/min/g 鲜重）= A÷（ε×d）×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T = 64.1×A÷W 2. 细胞PL活性 酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每104个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。 PL活性（nmol/min/104cell）= A÷（ε×d）×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T = 64.1×A÷细胞数量 3. 培养液PL活性 酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。 PL活性（nmol/min/mL）= A÷（ε×d）×V反总÷V样÷T = 64.1×A ε：不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数：5200L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，1mL；V样：反应体系中样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，30min
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
