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技术文章
维生素B6（Vitamin B6，VB6）试剂盒
点击次数：3383 发布时间：2022/4/18 8:19:21
分光光度法50管/48样 注 意：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 维生素B6（Vitamin B6）又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在体内以磷酸酯的形式存在，是一种水溶性维生素，在细胞中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢，对生物体具有其重要的作用。 测定原理： VB6与4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物，在390nm有特征吸收峰。 自备实验用品及仪器： 天平、研钵、离心机、可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL玻璃比色皿、蒸馏水。 试剂组成和配制 ： 提取液：液体35mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：液体1mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体12mL×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体18mL×1瓶，4℃避光保存。 试剂四：液体18mL×1瓶，4℃避光保存。 样本处理： 1. 组织：将样品磨碎，按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，16000rpm离心10min，取上清测定（动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟）。 2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入0.6mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）；加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，16000rpm离心10min，取上清测定。 3. 血清：直接测定。 测定操作： 空白管 测定管 样品（μL） 200 试剂一（μL） 200 试剂二（μL） 200 200 试剂三（μL） 300 300 试剂四（μL） 300 300 充分混匀，25℃反应20min，于1mL玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定390nm处吸光值，记为A空白管和A测定管，△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。 计算公式： 标准曲线：y = 0.3635x+0.0205，R2 = 0.9986 1. 按照蛋白含量计算 VB6含量（μg/mg prot）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷（V样×Cpr） = 13.76×（△A - 0.0205）÷ Cpr 2. 按照样本质量计算 VB6含量（μg/g）=（△A - 0.0205）÷ 0.36359 ×V反总÷（V样×W÷V样总） = 13.76×（△A - 0.0205）÷ W 3. 按照细胞数量计算 VB6含量（μg/104 cell）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总） = 13.76×（△A - 0.0205）÷ 细胞数量 4. 按照液体体积计算 VB6含量（μg/mL）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷V样 =13.76×（△A - 0.0205） V反总：反应总体积，1mL；：V样：加入样本体积，0.2mL；V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g 注意事项： 1. 若测定结果中吸光值超过1，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。 2. 蛋白浓度较高的样品，比如动物组织，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再测定，在计算公式中乘以稀释倍数。 3. 显色完成后立即进行测定。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
