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技术文章
乳酸含量（lactic acid，LA）试剂盒
点击次数：3314 发布时间：2022/4/15 8:51:33
分光光度法50管/24样 测定意义： 乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。 乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD+还原生成NADH和H+，H+传递给PMS生成的PMSH2还原INT生成红色物质，在530nm处有特征吸收峰。 天平、研钵、离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。 提取液：液体55mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体12mL×1瓶，4℃保存。 试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用加入1.5mL蒸馏水充分溶解。 试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用加15mL蒸馏水充分溶解。 试剂五：粉剂×1支，4℃避光保存。 标准品：液体1mL×1支，4℃保存。 显色液：临用根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1（mL)：0.3（mL)：3（mL)：15（mg）的比例充分混匀。（注意：现配现用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，试剂盒中带有5个棕色空瓶） 样本处理： 1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取上清测定。 2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）；于4℃，12000g离心10min，取上清测定。 3. 血清：直接测定。 测定操作： 样品对照管 样品测定管 标准对照管 标准测定管 50 50 50 50 300 450 300 450 150 150 200 200 200 200 300 300 300 300 注意：标准对照管和标准测定管只需测定一次，每个样品测定管设一个样品对照管 计算公式： 1. 按照蛋白含量计算 LA含量（μmol/mg prot）=△A样÷△A标×C标÷ Cpr =2×△A样÷△A标÷ Cpr 2. 按照样本质量计算 LA含量（μmol/g 鲜重）=△A样÷△A标×C标÷ W =2×△A样÷△A标÷ W 3. 按照细胞数量计算 LA含量（μmol/104 cell）=△A样÷△A标×C标÷ 细胞数量 =2×△A样÷△A标÷ 细胞数量 4. 按照液体体积计算 LA含量（μmol/mL）=△A样÷△A标×C标 =2×△A样÷△A标 C标：标准品浓度，2mmol/L ；W：样本质量，g/mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL 注意事项 1. 若吸光值超过2，请进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。 2. 低检出限为1.8μmol/L。
注 意：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定原理：
自备实验用品及仪器：
试剂组成和配制：
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
