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技术文章
植物β-淀粉酶（β-amylase，β-AL）试剂盒
点击次数：3421 发布时间：2022/4/6 7:43:06
植物β-淀粉酶（β-amylase，β-AL）试剂盒说明书
酶标法 100管/48样
测定意义：
淀粉酶负责水解淀粉，主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
测定原理：
还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸，β-淀粉酶不耐热。根据上述特性，钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、酶标板、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：50mL×1瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用；
试剂二：40mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
称取约0.05g样本，加入0.4mL蒸馏水，研磨匀浆；将匀浆倒入离心管中，提取液在室温下放置提取15min，每5min振荡1次，使其充分提取；3000g，常温离心10min，取上清液加蒸馏水定容至5 mL，摇匀，即淀粉酶原液。
吸取上述淀粉酶原液0.5mL，加入2mL双蒸水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于（α＋β）淀粉酶总活力的测定。
测定步骤和操作表：
| 试剂名称（μL） | α淀粉酶活力测定 | 总淀粉酶活力测定 | ||
| 对照管 | 测定管 | 对照管 | 测定管 | |
| 淀粉酶原液 | 125 | 125 |
|
|
70℃水浴15min左右，冷却
| 淀粉酶稀释液 |
|
| 125 | 125 |
| 试剂一 | 250 |
| 250 |
|
将以上对照管、测定管和试剂二置于40℃恒温水浴中保温10min左右
| 试剂二 | 125 | 125 | 125 | 125 |
在40℃恒温水浴中准确保温5min
| 试剂一 |
| 250 |
| 250 |
混匀，室温静置10min，在540nm下测定吸光度，从左到右分别记为A1、A2、A3和A4。
酶活性计算：
1、标准条件下测定回归曲线为y=0.04475x - 0.022； x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、α淀粉酶活性计算
（1）按照样品质量计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
α淀粉酶活性(U/g鲜重)=(A2-A1＋0.022)÷0.04475÷(W÷V样总)÷T=22.3×(A2-A1＋0.022)÷W
（2）按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α淀粉酶活性(U/mg prot)=(A2-A1＋0.022)÷0.04475÷Cpr÷T=2.23×(A2-A1＋0.022) ÷Cpr
3、总淀粉酶活性计算
（1）按照样品质量计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
总淀粉酶活性(U/g鲜重)=5×(A4-A3+0.022)÷0.04475÷(W÷V样总)÷T=112×(A4-A3+0.022)÷W
（2）按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
总淀粉酶活性(U/mg prot)=5×(A4-A3+0.022)÷0.04475÷Cpr÷T=11.2×(A4-A3＋0.022)÷Cpr
4、β-淀粉酶活性计算
（1）按照样品质量计算
单位定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
β-淀粉酶活性(U/g鲜重)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[112×(A4-A3＋0.022)-22.3×(A2-A1＋0.022)]÷W
（2）按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
β-淀粉酶活性（U/mg prot）=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[11.2×(A4-A3＋0.022)-2.23×(A2-A1＋0.022)]÷Cpr
5：总淀粉酶稀释倍数；V样总：提取液总体积，5 mL； W：样品质量，g；T：反应时间，5min。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
