企业档案
会员类型：旗舰版
已获得阿仪网信誉 等级评定
(0 -40)基础信誉积累，可浏览访问
(41-90)良好信誉积累，可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累，可持续信赖
阿仪网旗舰版会员：9年
工商认证 【已认证】
最后认证时间：
注册号： 【已认证】
法人代表： 【已认证】
参观次数：7957985
手机网站：http://wap.app17.com/c137908/
旗舰版网址：http://www.yajiml.com
技术文章
天冬酰胺合成酶(AS)活性测定试剂盒
点击次数：3365 发布时间：2022/4/2 7:39:08
分光光度法 50管/48样 注 意：正式测定务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： 天冬酰胺合成酶是广泛存在于生物体内的一类氨基转移酶，催化谷氨酞胺的氨基向天冬氨酸转移。当植物处于氨毒时天冬酞胺的形成是一种解毒反应。 AS催化L-天冬酰胺水解成L-天冬氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。 需自备仪器和用品： 台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。 试剂一×1瓶，60 mL，4 ℃保存； 试剂二×1瓶，20 mL，4 ℃保存； 试剂三×1瓶，30 mL，常温保存； 试剂四×1瓶，10 mL，常温保存； 试剂五×1瓶，6 mL，常温保存； 试剂六×1瓶，6 mL，常温避光保存。 1、细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、血清（浆）样品：直接检测。 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。 2、样品测定（在EP中加入下列试剂）： 试剂名称（uL） 测定管 对照管 样本 25 蒸馏水 25 试剂一 100 100 试剂二 400 400 混匀，37℃水浴1 小时 试剂三 525 525 混匀，8000 g，25℃离心10 min；取上清液，在EP管中加入下列试剂 上清液 650 650 试剂四 150 150 试剂五 100 100 试剂六 100 100 混匀，室温静置15min，420nm处读取吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。对照管只要做一管 注意：试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。 计算： 标准条件下测定的回归方程为y = 0.662x -0.0434；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值A。。 1、血清（浆）AS活性 单位定义：每mL血清（浆）每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。 AS（μg/h/mL）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷V样÷T=31.722×(ΔA+0.0434) 2、组织、细菌或细胞中AS活力的计算: （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。 AS活力（μg/h/mg prot）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷(V样×Cpr)÷T =31.722×(ΔA+0.0434) ÷Cpr （2）按样本鲜重计算： 单位的定义：每g组织每小时产生1μg氨定义为一个酶活力单位。 AS活力（μg/h/g 鲜重）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =31.722×(ΔA +0.0434) ÷W （3）按细菌或细胞密度计算： 单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。 AS活力（μg/h/104 cell）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.0634×(ΔA+0.0434) T：反应时间，1h； V反总：反应体系总体积：0.525mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.025mL；V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500万
测定原理：
试剂组成和配制：
粗酶液提取：
测定步骤：
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
