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技术文章
羟脯氨酸（Hydroxyproline，HYP）试剂盒
点击次数：3364 发布时间：2022/3/23 9:41:53
（酶标法） HYP是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。 样品经酸水解产生游离的HYP，进一步被氯胺T氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值，可计算HYP含量。 天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、酶标仪、96孔酶标板、6mol/L盐酸和蒸馏水。 组织提取液：6mol/L盐酸，自备。浓盐酸：H2O（V/V）= 1:1，室温保存。 细胞提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：液体4mL×1瓶，4℃避光保存。 试剂二：液体4mL×1瓶，4℃避光保存。 1. 组织：称取约0.5g样品于玻璃管，加入5mL的组织提取液，置于110℃烘箱，水解6至12小时，16000rpm，25℃，离心20min，用提取液定容至5mL，取上清待测。 2. 细胞：取500万个细胞，加入2mL的细胞提取液，于高压消毒器中15磅保持30min，自然降压后待测。 对照管 测定管 样本（mL） 0.04 试剂一（mL） 0.04 0.04 混匀，室温静置20min 试剂二（mL） 0.04 0.04 H2O（mL） 0.12 0.08 混匀，60℃，20min，取出后室温静置15 min，对照管调零，测定A560。 羟脯氨酸含量计算公式 标准曲线：y=64.875x+ 0.0251，R2=0.9991 组织羟脯氨酸含量（mg/g）= 0.3854×（A560-0.0251）÷样品质量 细胞羟脯氨酸含量（mg/104 cell）= 0.7708×（A560-0.0251）÷细胞数量 1、 OD值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。 2、 试剂有一定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。
测定意义
测定原理
自备实验用品及仪器
试剂组成和配制
羟脯氨酸提取
测定操作表
注意事项
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
