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技术文章
组织总磷含量测定试剂盒说明书
点击次数：3378 发布时间：2022/3/23 9:41:03
组织总磷含量测定试剂盒说明书
酶标法100T/96S
测定意义：
磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率，进而为合理施肥提供依据。
测定原理：
总磷经消化后，转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法，一定条件下，钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质，通过测定660nm光吸收，即可计算无机磷含量，进而可计算出组织中总磷含量。
自备仪器和用品：
酶标仪、离心机、水浴锅、可调式移液枪、酶标板、蒸馏水和浓硫酸。
试剂组成和配置：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存（强腐蚀性，强氧化性）。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用配制，加入15 mL蒸馏水，溶解后再加入10 mL试剂二，混匀。
标准品：液体×1支，20 μ mol/L无机磷标准液，－20℃保存。
有机磷消化：
取带盖试管，进入确称取的约0.1 g组织，加浓硫酸1.0 mL，盖紧（防止水分散失）后沸水浴10min左右，待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后，加试剂一200μL，充分混匀，盖紧后继续沸水浴，直到溶液呈透明状，取出室温冷却后，加蒸馏水8.8 mL，充分混匀；室温，10000rpm，离心10min，取上清液，待测。
测定：
1. 酶标仪预热30 min以上，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。
2. 打开水浴锅，调节温度到40℃。
3. 空白孔：取EP管，依次加入200 μ L蒸馏水，200μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后，取200μ L加入酶标板空白孔中，于660 nm测定吸光度，记为A空白。
4. 标准孔：取EP管，依次加入20μL标准液，180 μ L蒸馏水，200μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后，取200μ L加入酶标板空白孔中，于660 nm测定吸光度，记为A标准。
5. 测定孔：取EP管，依次加入20μL待测液，180 μ L蒸馏水，200μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后，取200μ L加入酶标板空白孔中，于660 nm测定吸光度，记为A测定。
组织总磷含量计算：
总磷含量(mmol /g FW)
= [C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷W
=1×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷W
C标准液：1 mmol/L；V总：上清液总体积，10 mL=0.01 L。W：样品质量，g。
注意事项：
1. 试剂三需临用配制，限当天使用。
2. 测定先用1~2个样品做预实验，如吸光值很高，需用蒸馏水做相应稀释。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
