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技术文章
脂蛋白酯酶（Lipoprotein lipase，LPL）试剂盒说明书
点击次数：3437 发布时间：2022/3/17 9:01:03
微量法100T/48S 注 意 ：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 脂蛋白酯酶是脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、乳腺细胞及巨噬细胞等实质细胞合成的一种酶，可催化甘油三脂水解为脂肪酸和单酸甘油酯，以供组织氧化供能和贮存，并在不同的组织表现出不同的生理意义。 测定原理： 脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕榈酸酯产生4-硝基苯酚，在400nm有特征吸收峰。 自备实验用品及仪器： 天平、冷冻离心机、研钵、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。 试剂组成和配制 ： 试剂一：液体105mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体4mL×1瓶，4℃避光保存。 试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。 样品处理： 1. 组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清待测。 2. 细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）；然后于4℃，10000g离心10min，取上清待测。 3. 血清：直接测定。 测定操作： 对照管 测定管 样品（μL） 20 20 试剂一（μL） 80 试剂二（μL） 80 混匀，45℃水浴10min 试剂三（μL） 100 100 充分混匀，25℃静置2min，于微量石英比色皿/96孔板，测定400nm处吸光值，记为A对照管和A测定管，△A=A测定管- A对照管 计算公式： a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准曲线：y= 0.0581x -0.0169，R2=0.9982 1．按照蛋白浓度计算 酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。 LPL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.0169）÷ 0.0581×V反总÷（V样×Cpr）÷T = 17.21×（△A+0.0169）÷Cpr 2．按照样本质量计算 酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。 LPL活性（μmol /min/g 鲜重）=（△A+0.0169）÷0.0581×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T = 17.21×（△A+0.0169）÷W 3．按照细胞数量计算 酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每104个细胞每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。 LPL活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.0169）÷0.0581×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T = 17.21×（△A+0.0169）÷细胞数量 4．按照液体体积计算 酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫升血清每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。 LPL活性（μmol /min/mL）=（△A+0.0169）÷0.0581×V反总÷V样÷T = 17.21×（△A+0.0169） V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min b．用96孔板测定的计算公式如下 标准曲线：y= 0.029x -0.0169，R2=0.9982 1．按照蛋白浓度计算 酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。 LPL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.0169）÷ 0.029×V反总÷（V样×Cpr）÷T = 34.42×（△A+0.0169）÷Cpr 2．按照样本质量计算 酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。 LPL活性（μmol /min/g 鲜重）=（△A+0.0169）÷0.029×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T = 34.42×（△A+0.0169）÷W 3．按照细胞数量计算 酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每104个细胞每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。 LPL活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.0169）÷0.029×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T =34.42×（△A+0.0169）÷细胞数量 4．按照液体体积计算 酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫升血清每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。 LPL活性（μmol /min/mL）=（△A+0.0169）÷0.029×V反总÷V样÷T = 34.42×（△A+0.0169） V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min 注意事项： 1. 试剂三加入混匀后静置两分钟立即测定，否则影响吸光值。 2. 吸光值过高或者测定结果不稳定，则将酶液进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
