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技术文章
BCA法蛋白含量测定试剂盒说明书
点击次数：3454 发布时间：2022/3/9 9:19:23
分光光度法 50管/48样 注 意 ： 正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。 测定原理： 碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将Cu2+还原成Cu+；2分子的BCA与Cu+结合，生成紫色络合物，在540-595nm有吸收峰，562nm处吸收峰强。 自备仪器和用品： 台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂A：液体60mL×1瓶，4℃保存。 试剂B：液体1.2mL×1支，4℃保存。 标准蛋白：液体2 mL×1支，4℃保存。 工作液配制： 临用请根据拟用工作液体积（样本数×1 mL），将试剂A和B按照50：1的比例混合，盖紧后充分混匀。 样品中可溶性蛋白质提取： 1. 液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。 2. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水） 冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即待测液。 3. 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 测定操作： 1. 分光光度计预热30min，调节波长到562 nm，蒸馏水调零。 2. 工作液置于60℃水浴预热30 min。 空白管 标准管 测定管 蒸馏水（μL） 20 标准品（μL） 20 待测液（μL） 20 工作液（μL） 1000 1000 1000 混匀后置于60℃保温30min，于1mL比色皿在562nm处测定吸光值A，分别记为A空白管、A标准管、A测定。 注意：空白管和标准管只需要做一次。 计算公式： Cpr (mg/mL) = C标准品×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管） = 0.5×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管） Cpr (mg/g)= C标准品×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）÷ W = 0.5×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）÷ W W: 样本质量，g 注意事项： BCA法蛋白含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在20-5000μg/ml样品。测定取1-2个样做预实验，若A测定管－A空白管﹥1.5，需将样本用提取液稀释后再测定，以确保测定的准确性。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
