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技术文章
LAD2 人肥大细胞特点及应用
点击次数：531 发布时间：2026/8/4 14:09:50
LAD2（Laboratory of Allergic Diseases 2）人肥大细胞
一、基础来源
来源于系统性肥大细胞增多症患者骨髓 CD34⁺造血祖细胞；无 KIT D816V / V560G 突变，区别于 HMC-1。悬浮生长人肥大细胞系，是目前体外最接近原代人肥大细胞的成熟细胞模型。
二、核心生物学特点
1. 生长特性（重点！你遇到漂浮问题可以对应参考）
悬浮细胞，圆形、胞内富含异染颗粒，甲苯胺蓝染色呈异染性；直径 8–15 μm
严格依赖 rhSCF（重组人干细胞因子，100 ng/mL），缺失 SCF 持续凋亡、大量漂浮
倍增时间：10～14 天，增殖缓慢
培养方式：半量换液（每周 1 次），不离心全换液；密度维持 0.3～1×10⁶ cells/mL，高密度极易出现细胞漂浮死亡
⚠️常见踩坑：直接全部弃上清、缺少 SCF、频繁离心、密度过高 → 大量漂浮凋亡
2. 表面标志物（成熟肥大细胞特征）
✅ 稳定高表达功能性 FcεRI（IgE 高亲和力受体）、CD117 (c-KIT)
✅ 表达 MRGPRX2（关键！非 IgE 通路激活受体）
CD9、CD13、CD45、CD63、CXCR4、CCR5 等；低表达 CD14、CD31
3. 功能特点（最大优势）
IgE 依赖性脱颗粒通路完整
IgE 预致敏 + 抗 IgE 交联 → 释放组胺、β- 己糖胺酶、类胰蛋白酶、促炎因子（TNF-α、IL-8、IL-13 等）
MRGPRX2 介导非免疫性脱颗粒
Compound48/80、P 物质、LL-37、神经肽均可激活，模拟假性过敏、药物诱发超敏
同时释放预存颗粒介质 + 新生脂质介质（PGD₂）
局限：相比皮肤原代肥大细胞，糜蛋白酶（chymase）表达偏低
4. LAD2 VS HMC-1 关键对比（选型必看）
表格
特征 LAD2 HMC-1
KIT 突变 无突变，依赖 SCF 携带 D816V，不依赖 SCF
FcεRI 表达 高、功能完整 极低，几乎无法 IgE 致敏脱颗粒
MRGPRX2 表达 高，功能强 低，响应弱
成熟度 成熟肥大细胞表型 偏未成熟前体细胞
增殖速度 很慢（10–14 天倍增） 快速（3–4 天倍增）
适用实验 IgE 过敏、假性过敏脱颗粒 增殖、肥大细胞肿瘤、KIT 通路
三、标准科研应用场景
1. 过敏性疾病机制研究（最主流用途）
I 型超敏反应、哮喘、过敏性鼻炎、荨麻疹、食物过敏体外模型
FcεRI 下游信号通路：Syk、PI3K、MAPK、钙信号调控
肥大细胞与上皮细胞、神经元、免疫细胞共培养互作
2. 非 IgE 介导过敏 / 药物超敏（MRGPRX2 方向）
抗生素、造影剂、多肽药物诱发假性过敏机制
神经源性炎症：P 物质、神经肽调控肥大细胞活化
皮肤瘙痒、慢性自发性荨麻疹机制
3. 药物筛选平台
体外筛选抗过敏、抗脱颗粒化合物
评价候选药物抑制肥大细胞活化、介质释放能力
检测新药是否诱发 MRGPRX2 激活（药物安全性评价）
4. 炎症、免疫与肿瘤微环境
肥大细胞促炎因子、趋化因子分泌
肥大细胞调控血管生成、肿瘤免疫
肥大细胞参与自身免疫病研究
5. 肥大细胞增多症基础研究
研究 SCF/KIT 通路、细胞存活、介质释放调控（细胞无 KIT 突变，适合研究野生型 c-KIT 信号）
四、常用刺激方案（实验常用）
IgE 依赖通路
人 IgE 过夜致敏 → 抗 IgE 刺激，检测 β-hex、组胺释放
MRGPRX2 通路
Compound48/80、Substance P、LL-37
其它刺激：IL-33、ATP、Thapsigargin
五、培养关键 Tips（解决你 “细胞漂浮” 问题）
培养基：StemPro-34 SFM + 2 mM Gln + 100 ng/mL rhSCF；不要长期使用普通 RPMI
每周半量换液，不要离心洗涤；离心参数 200–250 g，5 min，转速过高损伤细胞上浮
密度不要超过 1×10⁶/mL，密度过高营养耗尽、自分泌凋亡信号，大量漂浮
SCF 必须持续添加！缺失 SCF 3～5 天大量细胞凋亡漂浮
避免频繁移出孵箱长时间操作，悬浮肥大细胞应激极易死亡上浮
若持续大量漂浮：优先排查 SCF 活性、支原体污染、细胞密度、冻存复苏状态
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
