当前位置：阿仪网>上海雅吉生物科技有限公司>技术文章>血清制备/ELISA
企业档案
会员类型：旗舰版
已获得阿仪网信誉 等级评定
(0 -40)基础信誉积累，可浏览访问
(41-90)良好信誉积累，可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累，可持续信赖
阿仪网旗舰版会员：9年
工商认证 【已认证】
最后认证时间：
注册号： 【已认证】
法人代表： 【已认证】
参观次数：7957985
手机网站：http://wap.app17.com/c137908/
旗舰版网址：http://www.yajiml.com
技术文章
血清制备/ELISA
点击次数：3455 发布时间：2022/2/24 9:12:05
血清制备
1.取血后，37oC 下，让血液凝固 1 到 2 小时（不加抗凝剂）；
2.4oC 冰箱过夜（让血块固缩）；
3.当血清自然析出后， 4oC，3000 转/分，离心 10 分钟，分离血清，弃去不溶物；
4.将血清移至一干净试管，并分装成小份，储藏在-80oC。
ELISA
一、包被抗原
1.用 50mM 的碳酸盐包被缓冲液（pH 9.6）溶解 抗 原 ，使抗原浓度为 10-20 μg/ml，加 100 μl/孔到 96 孔酶标板，4 oC 放置过夜。
2. 第二天弃去包被液后，用 PBST 洗涤 3 次，每孔加入 150 μl 1％ BSA 37 oC封闭 1 小时。
3. PBST 洗涤 3 次后，每孔加入 100 μl 不同倍比稀释度的血清，并加入对照样品，37 oC 孵育 2 小时。
4. PBST 洗涤 5 次后，加入 100μl 稀释后的 HRP 标记的二抗，37 oC 孵育 1 小时 。
5. PBST 洗涤 5 次后，显色剂显色 20 min 后，酶标仪上读取 A405 吸收值。
二、包被细胞
1.在 96 孔培养板上接种细胞数为 1 x 104 cells/well，37℃过夜培养。
2. 第二天用 PBS 洗涤培养板 2-3 次。
3. 加入 125 ?l/well 10% Formalin（1:10 稀释）, 室温下固定 15 min。
4. 用 ddH2O 洗涤培养板 3 次，并晾干，储藏在 2-8oC 备用。
5. 用 PBST 洗涤 3 次，每孔加入 150 μl 1％ BSA 37 oC 封闭 1 小时。
6. PBST 洗涤 3 次后，每孔加入 100 μl 不同倍比稀释度的血清，并加入对照样品，37 oC 孵育 2 小时。
7. PBST 洗涤 5 次后，加入 100 μl 稀释后的 HRP 标记的二抗,37 oC 孵育 1 小时。
8. PBST 洗涤 5 次后，显色剂显色 20 min 后，酶标仪上读取 A405 吸收值。50mM 的碳酸盐包被缓冲液：0.05mol/L pH9.6 碳酸缓冲液,4℃，保存,Na2CO3 0.15 克, NaHCO3 0.293 克,蒸馏水稀释至 100 ml。ABTS 作为底物进行显色反应(10ml)：
0.2M
Na2HPO4
2.4ml
0.1M
柠檬酸 2.6ml
ddH2O
5ml
ABTS
5mg
H2O2(30%)
4ul（用加入）
注意：
一般做倍比稀释进行检测，需要有相应的对照血清。
不同的显色系统对应不同的光吸收值。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
