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技术文章
口蹄疫A型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书
点击次数：2844 发布时间：2024/9/25 8:43:50
【产品名称】 通用名：口蹄疫A型抗体检测试剂盒（酶联免疫法） 英文名：Test Kit for Antibodies to Foot ａnd Mouth Disease Virus A（ELISA） 【包装规格】×2/盒96T×1/盒、96T、96T×5/盒 【预期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot ａnd Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。 本试剂用于检测牛、羊、猪血清中口蹄疫A型抗体，可用于口蹄疫A型疫苗免疫效果评价。 【原 理】 本试剂盒由预包被口蹄疫A型抗体的酶标板、抗体工作液、抗原液、酶标记物及其他配套试剂组成，应用阻断酶联免疫法（ELISA）原理检测牛、羊、猪血清样本中口蹄疫A型抗体。实验时将稀释的样本与抗原液同时加入酶标板中孵育，样本中的抗体与酶标板上的抗体竞争抗原，阻断抗原与板的结合；经洗涤后，再加抗体工作液孵育；经洗涤后加入酶标记物孵育；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有口蹄疫A型抗体。 【试剂盒组成】 序号 名称 规格/96T×1 规格/96T×2 规格/96T×5 1 酶标记物 6ml×1(红盖) 11ml×1(红盖) 26ml×1(红盖) 2 抗体工作液 6ml×1(蓝盖) 11ml×1(蓝盖) 26ml×1(蓝盖) 3 抗原液 6ml×1(黑盖) 11ml×1(黑盖) 26ml×1(黑盖) 4 20X浓缩洗涤液 40ml×1(白盖) 40ml×2(白盖) 200ml×1(透明) 5 底物液A 6ml×1(白盖) 11ml×1(白盖) 26ml×1(白盖) 6 底物液B 6ml×1(黑盖) 11ml×1(棕盖) 26ml×1(黑盖) 7 终止液 6ml×1(黄盖) 11ml×1(黄盖) 26ml×1(黄盖) 8 阳性对照 1.0 ml×1(红盖) 1.5 ml×1(红盖) 2.0 ml×1(红盖) 9 阴性对照 1.0 ml×1(绿盖) 1.5 ml×1(绿盖) 2.0 ml×1(绿盖) 10 酶标板 96T×1 96T×2 96T×5 11 盖板膜 1 2 5 12 自封袋 1 1 2 13 说明书 1 1 1 14 稀释板 1 2 5 【储存及有效期】 2～8℃保存，有效期12个月。 包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。 【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。 【样品准备】 1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，期需置-20℃保存。 2.用工作洗涤液将待检牛、羊先按32倍稀释（如5μl血清加入155μl工作洗涤液中，混匀），待检猪血清按16倍稀释（如5μl血清加入75μl洗涤液中，混匀），阴、阳性对照不用稀释。 3.浓缩洗涤液使用应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。 【检验方法】 1.使用将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。 2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。 3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl，样品孔每孔先加入工作洗涤液25ul，再加入稀释后的样品25μl；后都加入抗原液50μl。 注：加入抗原后牛、羊样本稀释比例相当于1:128，猪样本稀释比例相当于1:64。 4.震荡混匀10，盖好盖板膜，置37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。 5.甩去孔内液体，每孔加350μl工作洗涤液，静置30后弃去，重复洗涤5次，后一次拍干。 6.每孔加抗体工作液50μl，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。 7.洗涤，同步骤5。 8.每孔加酶标记物50μl，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。 9.洗涤，同步骤5。 10.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应15分钟。 11.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。 【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照A值≥1.0，阳性对照A值≤阴性对照A值×50%。 【检验结果的解释】 1.PI（阻断率）=（1- 阴性对照平均A值）×100%，PI≥50%为阳性；PI＜50%为阴性。 2.本实验检测牛、羊血清结果为阳性时表明待检样本中含有口蹄疫A型抗体，且效价高于1:128，达到保护水平；反之检测结果为阴性时表明待检样本中不含有口蹄疫A型抗体，或效价低于1:128，未达到充足保护水平。 3.本实验检测猪血清结果为阳性时表明待检样本中含有口蹄疫A型抗体，且效价高于1:64，达到保护水平；反之检测结果为阴性时表明待检样本中不含有口蹄疫A型抗体，或效价低于1:64，未达到充足保护水平。 4.如需了解样本抗体的终效价，可将样本进行梯度稀释，使PI≥50%的高稀释比例即为该样本抗体的终效价。 【试验方法的局限性】 该试验仅作为定性牛、羊、猪血清中口蹄疫A型抗体，根据PI值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。 该试剂盒不适用于合成肽疫苗免疫抗体效价评估。 【注意事项】 1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。 2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。 3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。 4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以全溶解。 5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。 6.用于检测的样品应保持新鲜。 7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。 8.不同批号试剂组分不得混用。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
