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技术文章
38C13小鼠B淋巴瘤细胞
点击次数：2770 发布时间：2024/6/21 8:39:23
38C13小鼠B淋巴瘤细胞 培养说明书
一、细胞培养条件
二、细胞收到后处理
培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的好办法。收到细胞用 75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入 37℃、5%CO2的培养箱
中静置 3-4 小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（好40x,100x,200x 各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默
认收到状态良好。（注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养）
三、细胞培养步骤
细胞传代：如果未超过 80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留 5ml 完全培养基，放入 37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超 80%，即可进行传代培养，传代具体步
骤如下细胞传代：
A1、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心 8-10 分钟，弃上清液，补加 1-2ml 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按 1:2 到
1:3 的比例分到新的含 8ml 培养基新皿中或者瓶中。
A2、悬浮细胞冻存：
1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，将 T25 培养瓶中的悬液收集至离心管中 1000rpm离心 5min；
2、弃上清，沉淀细胞加入 1ml/支的雅吉生物无血清冻存液（C7001），混匀后加入冻存管中。（如：冻一支，加入 1ml 无血清冻存液即可）
3、将冻存细胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放 24 小时以上。
产品名称 38C13 小鼠 B 淋巴瘤细胞
生长特性 半贴壁半悬浮
冻存条件 无血清冻存液
培养体系 1640+10%FBS+1%双抗
传代方法 一次建议 1:2 传代
传代情况 2~3 天换液/传代
备注
悬浮细胞离心收集，请勿直接倒掉细胞培养液！ 贴壁细胞，请按贴壁细胞处理。
B1、对于贴壁细胞，传代可参考如下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1-2ml 至培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2min，然后 在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加 5ml 以上完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，在 1000RPM 条件 下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按 1：2 的比例进行分瓶传代（两个 T25 瓶），补充新的完全培养基至 5-8ml/ 瓶，后放入到 37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
B2、贴壁细胞冻存：
1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 T25 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后 加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管 中，1000rpm 离心 5min；
3、 弃上清，沉淀细胞加入 1ml 的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻 存管中。
细胞复苏：
1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直 至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；
3、弃上清，沉淀用 5ml 完全培养基重悬，接种至 T25 培养瓶，放于 37℃,5%CO2细胞培养箱 中培养；
4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项：有些细胞比较特殊，如贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正
常现象。请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm 离心 5min，收集上清作过渡培养（后
期对比培养），沉淀加入胰酶 1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化 1-2 分钟后，加 5ml 完全培养
基终止反应。再离心，弃上清，加 1-2ml 完全培养基重悬。然后按 1:2 比例进行分瓶传代（两
个 T25），补充新的完全培养基至 5-8ml/瓶，后放入 37℃,5%CO2细胞培养箱中培养
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
