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技术文章
山羊传染性胸膜肺炎（pleuropneumonia）ELISA试剂盒间接法
点击次数：3222 发布时间：2024/3/29 9:10:56
山羊传染性胸膜肺炎（pleuropneumonia）ELISA试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
使用目的：
本试剂盒用于定性测定山羊血清，血浆及相关液体样本中传染性胸膜肺炎（pleuropneumonia）。
实验原理
本试剂盒采用间接法测定标本中山羊传染性胸膜肺炎（pleuropneumonia）。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，与样品中传染性胸膜肺炎（pleuropneumonia）温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过彻洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中山羊传染性胸膜肺炎（pleuropneumonia）的存在与否。，
试剂盒组成
| 1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 8 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 链霉亲和素-HRP | 6ml×1瓶 | 9 | 阴性对照 | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 10 | 阳性对照 | 0.5ml×1瓶 |
| 4 | 生物素标记的抗-IgG抗体 | 6ml×1瓶 | 11 | 密封袋 | 1个 |
| 5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 12 | 封板膜 | 3张 |
| 6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 13 | 说明书 | 1份 |
| 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 |
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标本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
操作步骤
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，37℃温育45分钟。
3. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复4次，拍干。
5. 加生物素标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟
6. 洗涤：操作同4。
7. 加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
8. 洗涤：操作同4。
9. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为传染性胸膜肺炎（pleuropneumonia）阴性
阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为传染性胸膜肺炎（pleuropneumonia）阳性
注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。
规格：
96人份/盒
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
