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技术文章
信号通路的研究思路
点击次数：3539 发布时间：2021/10/18 10:39:10
一、 概述
信号通路是指能将细胞外的分子信号经细胞膜传入细胞内发挥效应的一系列酶促反应通路。这些细胞外的分子信号（称为配体ligand）包括激素、生长因子、细胞因子、神经递质以及其它小分子化合物等。
细胞内的各个信号通路中上游蛋白对下游蛋白活性的调节（包括激活或抑制作用）主要是通过添加或去除磷酸基团，从而改变下游蛋白的立体构象完成的。构成信号通路的主要成员是蛋白激酶和磷酸酶，它们能够快速改变和恢复下游蛋白的构象。受体蛋白将细胞外信号转变为细胞内信号，经信号联放大、分散和调节，终产生一系列综合性的细胞应答，包括下游基因表达的调节、细胞内酶活性的变化、细胞骨架构型和DNA合成的改变等。这些变化并非都是由一种信号引起的，也可以通过几种信号的不同组合产生不同的反应。
二、 分类
1、 当信号分子是胆固醇等脂质时，它们可以轻易穿过细胞膜，在细胞质内与目的受体相结合；
2、 当信号分子是多肽时，它们只能与细胞膜上的蛋白质等受体结合，这些受体大都是跨膜蛋白，通过构象变化，将信号从膜外domain传到膜内的domain，然后再与下一别受体作用，通过磷酸化等修饰化激活下一别通路。
三、 信号通路研究策略
1、确定某一效应和参与该效应的信号通路：利用蛋白芯片或PCR芯片等确定该信号通路参与这一效应，以及该通路是处于激活状态还是抑制状态（这里的效应既可以是细胞水平，也可以是疾病水平）。
2、 确定通路中关键分子的表达水平：可以WB或qPCR检测相关分子的的变化，包括表达水平，定位变化以及活性变化。
3、确定通路中关键分子与该效应的关系：利用突变或干扰关键分子，检测相应的表型，确定该分子与这一效应之间的因果关系；以及后期过表达该关键分子做恢复实验进行验证。
4、 确定分子之间的作用方式：通过分子共表达、分子互作手段（如IP，GST-Pull down等）、分子共定位、活性、构象等检测手段，进一步明确分子作用的方式，以及结合的序列、结构域等。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
