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技术文章
酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(Folin-酚比色法
点击次数：3243 发布时间：2024/1/2 8:33:04
产品简介：
酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(Folin-酚比色法)酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶，溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜 pH 值为 4.5～5.5，酸性磷酸酶是一个蛋白家族，哺乳动物中其分子量从 18kD 到 100kD 不等，该酶分为两类，一类为酒石酸盐敏感型，一类为氟离子敏感型；溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型，而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。
酸 性 磷 酸 酶 (ACP) 检 测 试 剂 盒 (Folin- 酚 比 色 法 )(Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是以磷酸苯二钠作为底物，在酸性条件下 ACP 催化底物水解生成苯酚和无机磷，通过 Folin-酚(又称福林酚)测定苯酚的生成量，于分光光度计或酶标仪 680nm 处检测吸光度，以酶促反应时间为横坐标，以产物生成量为纵坐标绘制进程曲线，曲线的起始部分在某一段时间内呈直线，其斜率代表酶促反应的初速度，随着反应时间延长曲线斜率不断下降，因此测定 ACP 酶活力应该在进程曲线的初速度时间范围内进行，主要用于组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研域，不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成：
| 试剂(A): Phenol(10mM) | 1ml | 4℃ | 避光 | |||
| 试剂(B): 样品稀释液 | 50ml | 4℃ | ||||
| 试剂(C): ACP Assay Buffer | 0.6ml | 4℃ | 避光 | |||
| 试剂(D): ACP 终止液 | 125ml | RT | ||||
| 试剂(E): Folin-酚显色液 | 4.5ml | 4℃ | 避光 | |||
| 使用说明书 | 1 份 | |||||
1、蒸馏水
2、离心管或试管
3、水浴锅或恒温箱
4、比色杯或 96 孔板
5、分光光度计或酶标仪
操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
①血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，用于 ACP 的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要可用 PBS 或 NS 进行适当匀浆，一般细胞数量在 106 以上，组织应在 100mg 以上，3000~4000g 离心取上清，-20℃冻存，用于 ACP 的检测。
③植物样品：取适量的组织加入 NS 或 PBS，充分捣碎或研磨，静置 30min，用纱布或滤纸过滤，4000g 离心 20min，取上清液并测量体积，-20℃冻存，用于 ACP 的检测。
④高活性样品：可以使用样品稀释液、PBS 或 NS 稀释含有较高活性的样品后再行检测。 2、配制 ACP Assay 工作液：取 ACP Assay Buffer 温浴溶解，按 ACP assay Buffer：样
品稀释液=1：19 的比例混合，即为 ACP Assay 工作液。
3、配制 Folin-酚显色工作液：按 Folin-酚显色液： 蒸馏水=1：2 的比例混合即成。
4、稀释标准品：按 Phenol(10mM)：样品稀释液=1：24 的比例配制标准工作液，即 Phenol(0.4mM)，按下表梯度稀释。
5、ACP 加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管、对照管(选做)，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的酸性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测好能设置 2 平行管，求平均值。
| 加入物(ml)( | 空白管 | 标准管 | 测定管 | 对照管 |
| 样品稀释液 | 0.5 | － | － | － |
| 系列 Phenol 标准 | － | 0.5 | － | － |
| ACP Assay 工作液 | － | － | 0.25 | 0.25 |
| 待测样品 | － | － | 0.25 | － |
| 摇匀，立即计时，35℃确反应 10min，立即加入 ACP 终止液终止反应。空白管和标准管直接进行下边操作。 | ||||
| ACP 终止液 | 2.5 | 2.5 | 2.5 | 2.5 |
| Folin-酚显色工作液 | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
| 待测样品 | － | － | － | 0.25 |
| 摇匀，35℃保温显色 10min 以上。 | ||||
计算：
ACP活性单位的定义：在该实验条件下，每分钟每ml 酶液产生1μmol 酚(nmol/ml·min)所需的酶量为一个活性单位；以各标准管的吸光度为纵坐标，相应的酚含量为横坐标绘制酚含量-吸光度值曲线，即为标准曲线。根据测得的各待测样品的吸光度，于标准曲线上查出相应的酚含量，乘以稀释倍数后，换算为”nmol/ml·min”的活性单位。组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%
注意事项：
1、 待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。2、 建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品需避免反复冻融。
3、 如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应注意 96 孔板的大检测体积；虽然酶标仪可以检测，但推荐采用分光光度计。
4、 注意单次少测几个样品，以免样品过多导致的时间差异较大。
5、 所测样品的值高于标准曲线的上限，应用样品稀释液、PBS 或 NS 稀释样品后重新测定。
6、 待测样品中酸性磷酸酶活性较低时，可适当延长孵育时间至 30min。
有效期：6 个月有效；常温运输，4℃保存。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
