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技术文章
MinuteTM 凝胶中蛋白/核酸提取试剂盒
点击次数：3503 发布时间：2021/9/17 9:36:54
MinuteTM 凝胶中蛋白/核酸提取试剂盒 目录号 PN-019
描述：
被动洗脱和电洗脱是从聚丙烯酰胺/琼脂糖凝胶中提取蛋白质或核酸的常用方法。被动洗脱通常需要过夜孵 育，洗脱的蛋白浓度非常低，需要进一步浓缩。电洗脱（30- 120 分钟）比被动洗脱快但是需要特殊的电洗脱 仪，对于分子量较大的（>70KD）蛋白无法效提取，电洗脱液中通常含有表面活性剂和其他化学物质会影 响下游应用。我们的试剂盒可以快速的从凝胶中提取蛋白/核酸，无需特殊仪器，操作时间<10 分钟。 根据凝 胶染色的方法， 洗脱缓冲液可以是含有表面活性剂的缓冲液或纯净水。 洗脱体积在 10-200ul。 多个凝胶片段 可以在一个单管中进行处理，可获得高浓度蛋白。
应用：
可应用于 MALD-MS 分析，免疫动物，蛋白质相互作用和蛋白质-核酸相互作用研究等。核酸可用于 PCR 反 应，克隆和测序等。
试剂盒组分
1. 20 个离心管柱及 2.0ml 收集管
2. 20 个微型离心管（200ul）
3. 2g 提取粉
4. 4 根微型杵
储存：
室温储存
所需附加材料
台式离心机
操作方法：
A. 从聚丙烯酰胺凝胶中提取蛋白质
1.蛋白样品通过 SDS-PAGE 或 2D 分离后， 凝胶可以通过正染色法如标准的考马斯亮蓝染色或 者负染色法（见下面参考文献） 将凝胶去染色显示目标蛋白条带。如果凝胶用考马斯亮蓝染色， 需确保凝胶仅简单染色 （使用短时间显示目标条带， 通常不超过 5 分钟） ， 并且需要用双蒸 水至少冲洗 3 次。
2.用刀片从胶中切出感兴趣的条带， 并修剪掉过多的凝胶。用滤纸去除凝胶中多余的液体。 将 1-2 个凝胶切片放入提供的 200ul 管底（该管可以容纳多个凝胶切片） 3.用微型杵平端添加适量提取粉（约凝胶体积的 1/4- 1/3） 到管底。根据需要添加洗脱缓冲液（见 下文）到同一管中（20ul/胶片）。将微型杵尖端插入管底反复扭转减小凝胶体积使其匀浆。你 也可以用微型杵反复挤压凝胶使其匀浆（大约需要 1-2 分钟，微型杵是可重复使用，简单地用 蒸馏水冲洗， 用纸巾擦干） 。 继续加入按照 20-50ul/切片洗脱缓冲液到管中， 确保洗脱缓冲液可 以没过凝胶匀浆。盖上管子， 在 PCR 仪中， 94℃孵育 5- 10 分钟。涡旋震荡几下， 继续孵育 5- 10
分钟。延长孵育时间会增加蛋白产量。也可以盖上盖子 4℃过夜孵育。
4.打开 200ul 离心管和接收管管盖， 用刀片或剪刀将盖子全部修剪掉， 将离心管柱套入接收管后， 将 200ul 离心管开口向下插入离心管柱套管中，离心机高转速离心 2 分钟。弃掉离心管柱， 保存接收管中洗脱的蛋白即可。
B．琼脂糖凝胶中的核酸提取
1. 用刀片切出感兴趣的条带并修剪掉过多的凝胶。
2.将切下的胶片放入提供的 200ul 管中。加入加适量提取粉（约凝胶体积的 1/4- 1/3， 见上面） 到
管底。
3.用微型杵扭转研磨胶片减少体积使其匀浆如上述。 用刀片或剪刀将 200ul 离心管和接收管盖子
全部修剪掉。将 200ul 离心管开口向下插入离心管柱套管中，离心机高转速离心 1 分钟。弃 掉离心管柱，保存接收管中洗脱的核酸即可。
洗脱缓冲液的选择
洗脱缓冲液的选择取决于凝胶染色的方法以及下游的应用。如果染液中含有固定剂， 如甲醇和 乙酸。推荐使用含 0.1-0.5%SDS 或酸不稳定的表面活性剂的洗脱缓冲液。如果凝胶不染色或负 染色，蛋白可以用双蒸水或含有甲酸/水/异丙醇洗脱缓冲液（1:3:2 V/V/V
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
