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技术文章
酸溶血定性检测试剂盒
点击次数：3244 发布时间：2023/11/6 8:51:05
酸溶血定性检测试剂盒
红细胞(Red blood cell，RBC)也称红血球，是血液中数量多的一种血细胞，脊椎动物体内通过 RBC 运送氧气，RBC 同时还具有免疫功能。在贫血检查中可通过蔗糖水溶血试验来检测红细胞膜的缺陷， 尤其适用于检测阵发性睡眠性血红蛋白尿症(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, PNH)，该症为获得性红细胞膜缺陷引起的慢性血管内溶血，常在睡眠时加重，可伴发性血红蛋白尿和全血细胞减少。
酸溶血定性检测试剂盒是利用 PNH 红细胞对补体敏感性增高，在酸化的血清中经过 37℃孵育，易溶血，血清经过 56℃加热 30min，使补体灭活，病人红细胞不溶解，该试剂盒主要用于检测人、动物血液的红细胞膜的缺陷，尤其用于鉴定阵发性睡眠性血红蛋白尿症。该试剂盒仅用于科研域，不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成：
| 编号 名称 | 0259 50T | Storage |
| 试剂(A): 玻璃珠 | 150 粒 | RT |
| 试剂(B): PNH NaCl Buffer | 5ml | RT |
| 试剂(C): Acidic Buffer | 2×1.5ml | RT |
| 使用说明书 | 1 份 | |
自备材料：
1、生理盐水
2、与患者同血型的正常新鲜血液
3、水浴锅
操作步骤(仅供参考)：
1、制备脱纤维血清：取患者和与患者同血型的正常人静脉血 5ml，慢慢注入含有 3 个洁净玻璃珠的小容器中，立即轻轻的持续摇动，直至纤维蛋白出现并附着于玻璃珠上为止(一般需要 10～15min)。转移脱纤维血至洁净离心管，低速离心，取上清待用，即为脱纤维血清。
2、制备 50%红细胞悬液：取脱纤维血清，经生理盐水洗涤 3 次，每次都应颠倒、混匀、离心，尽量吸弃上清液，留下红细胞沉淀，加入等体积 PNH NaCl Buffer 重新悬浮红
细胞，即为 50%红细胞悬液。
3、取试管 6 支，按下表先加入同血型正常人新鲜血清 0.5ml，其中 3、6 两支试管在 56℃水浴 30min，使补体灭活，其余 4 管置于室温 30min。此后按下表顺序操作。
| 加入物(ml) | 待测管 | 对照管 | ||||
| 试管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 正常人新鲜血清 | 0.5 | 0.5 | — | 0.5 | 0.5 | — |
| 正常人 56℃灭活血清 | — | — | 0.5 | — | — | 0.5 |
| Acidic Buffer | — | 0.05 | 0.05 | — | 0.05 | 0.05 |
| 50%患者红细胞悬液 | 0.05 | 0.05 | 0.05 | — | — | — |
| 50%正常人红细胞悬液 | — | — | — | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
| 混匀，置于 37℃水浴中 1h(30min 时轻轻混匀一次)，离心。 | ||||||
| 阳性结果(溶血) | ± | 3+ | — | — | — | — |
结果判断：
| 正常人 | 不溶血 |
| PNH 患者第 1 管(未酸化的血清) | 不溶血或其轻微溶血 |
| PNH 患者第 2 管(酸化的血清) | 部分溶血 |
| PNH 患者第 3 管(加正常人灭活血清管) | 不溶血 |
注意：如果 PNH 患者第 3 管(加正常人灭活血清管)溶血，则说明此溶血不依赖于补体，故不是 PNH，可能是红细胞有其他缺陷(如球形红细胞增多症)，应做进一步鉴别。
参考区间：正常人无溶血。注意事项：
1、 所用器具必须洁净干燥，以免溶血造成假阴性。
2、 血清酸化后应注意密闭保存，尽快检测，避免 CO2 逸出导致血清酸度降低，影响溶血程度。
3、 如果患者多次输血，其血液中的不正常细胞会相应减少，可呈弱阳性或阴性。出现这种情况应延长孵育时间至 4～6h，再观察溶血情况。
4、 该实验可作为 PNH 的过筛实验，阴性可排除 PNH，阳性应做酸化溶血实验证实。
有效期：6 个月有效。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
